جداسازی و تخلیص پروتئین پلاسمایی نوع a از سرم خانم‌های باردار در پایان سه ماهه سوم

زمینه و هدف: پروتئین پلاسمایی مربوط به دوره بارداری نوع papp-a، گلیکوپروتئینی است که در طی بارداری در سلول‌های سین‌سیتیو‌تروفوبلاست جفت ساخته می‌شود و غلظت آن در سرم مادر همراه با پیشرفت مدت بارداری، افزایش می‌یابد. از آن جایی که غلظت آن 28 روز پس از بارداری قابل اندازه‌گیری است. مقدار این پروتئین تنها در خون مادران دارای جنین مبتلا به نشانگان داون در سه‌ماهه اول بارداری در مقایسه با مادران دارای جنین طبیعی کاهش می‌یابد. لذا در این پژوهش تخلیص papp–a از سرم خانم‌های باردار در آستانه زایمان صورت گرفته تا بتوان بر این اساس، در پژوهش‌های آتی روش ایمونولوژیکی مناسبی را برای اندازه‌گیری غلظت این پروتئین در سرم خانم‌های باردار در سه ماهه‌اول بارداری طراحی نمود. روش کار: جهت تخلیص papp–a سه مرحله کروماتوگرافی که به ترتیب شامل: ژل‌فیلتراسیون به کمک ستون سفادکس، افینیتی‌کروماتوگرافی به کمک ستون هپارین‌‌-‌‌سفاروزو افینیتی‌کروماتوگرافی‌منفی به کمک ستونcnbr – activated sepharose 4b متصل‌شده به ایمونوگلوبولین‌های تولید شده بر‌ضد پروتئین‌های تام سرم انسان، بودند انجام گرفت. جهت تهیه ستون افینیتی‌کروماتوگرافی‌منفی نیاز به تهیه ایمونوگلوبولین بر‌ضد پروتئین‌های تام سرم انسان بود که برای این‌منظور، ایمونیزاسیون خرگوش با سرم طبیعی انسان و سپس تخلیص ایمونوگلوبولین تولید شده در‌طی دو مرحله متوالی افینیتی‌ کروماتوگرافی صورت‌گرفت. پس از انجام مرحله سوم papp–a تخلیص‌‌‌یافته حاصل گردید.یافته ها: حجم مخلوط پروتئین های خانم‌های باردار در آستانه زایمان در پیک‌های اول، دوم، سوم و چهارم به ترتیب حدود 44، 40، 40 و 20 میلی‌لیتر بود.نتیجه گیری: روش اتخاذ شده در این پژوهش موجب به حداقل رساندن شرایط تخریب ساختمان papp – a می‌باشد.