بررسی تکثیر ژن های Vh و Vl از منبع Rna تک پلاسماسل انسانی

مقدمه و هدف: نخستین نسل آنتی بادی های درمانی منوکلونال با منشا موشی موجب بر انگیختن پاسخ ایمونولوژیکی در بدن انسان می شود. استفاده از آنتی بادی درمانی کاملاً انسانی علاوه بر کاهش ایمونوژنیسیته، بیشترین کارایی را به دنبال خواهد داشت. امروزه جهت تهیه آنتی بادی انسانی تکنیک های‌ نمایش فاژی و روش‌های مبتنی بر تک سلولb، مورد توجه قرار گرفته است. هدف از این پژوهش تکثیر ژن های vh و vl از منبع rna پلاسماسل انسانی می باشد.روش کار: از واکنش rt-pcr به منظور جداسازی و تکثیر قطعات ژن vh و vl از تک پلاسماسل غربالگری شده علیه آنتی ژن مورد نظر استفاده شد. در ابتدا با استفاده از بافر لیز کننده ی سلول، پلاسماسل ها لیز و جهت ساخت cdna استفاده گردیدند. ژن های آنتی بادی انسانی با استفاده از cdna حاصل از یک پلاسماسل و مجموعه پرایمر های آنتی بادی تکثیر و شش جفت پرایمر جهت تکثیر نواحی متغیر زنجیره سنگین (vh) و سبک (vl) مورد استفاده قرار گرفتند. در این پرایمر ها جایگاه برش آنزیم های محدودالاثر جهت کلون نمودن در وکتور مربوطه و توالی لینکر جهت اتصال نواحی vh و vl قرار داده شد. یافته ها: الکتروفورز طی واکنشpcr مشخص نموده که قطعات vh و vl به طول حدود bp400 به طور جداگانه تکثیر یافته-اند. توالی های به دست آمده از ژن های آنتی بادی با سایر توالی های موجود در پایگاه ncbi مشابهت 97 درصدی نشان داد.نتیجه گیری: پرایمرهای مورد استفاده در این پژوهش به گونه ای طراحی شدند که دارای توالی لینکر جهت تهیه scfv و جایگاه برش آنزیم های ncoi و noti جهت کلونینگ قطعات vh و vl هستند.