کلونینگ، افزایش بیان، تخلیص و مدل سازی مولکولی فتوپروتیین نمیوپسین 2 از شانه دار نمیوپسیس لیدی

به توانایی موجودات زنده برای نشر نور مریی از طریق سیستم واکنش‌های لومینسانس شیمیایی را بیولومینسانس می‌گویند. نمیوپسین 2 فتو پروتیینی است که از شانه دار نمیوپسیس لیدی کشف گردیده که نور را از طریق واکنش با کلسیم منتشر می‌کند. این پروتیین عضو خانواده فتو پروتیین‌های با قابلیت اتصال به کلسیم نظیر aequorin، mitrocomin، obelin و berovin می‌باشد. ژن نمیوپسین 2 از شانه دار دریایی نمیوپسیس لیدی بوده و بعد از شناسایی و جداسازی، در بانک ژن با کد 884175 ثبت شد. هدف از این تحقیق ساب کلونینگ ژن نمیوپسین در وکتور بیانی pet28a، و انتقال به باکتری e.coli، سویه bl21-de3 و افزایش میزان بیان آن تحت شرایط مختلف (غلظت‌های مختلف iptg ،دما، مدت زمان القای) می‌باشد. پس از انجام مراحل ذکر شده تخلیص پروتیین با استفاده از روش کروماتوگرافی تمایلی با دنباله هیستیدینی انجام شده و نهایتا با استفاده از روش sds-page احیایی نتایج مورد آنالیز قرار گرفت. تطبیق توالی نمیوپسین 2 با سایر فتو پروتیین‌ها به کمک برنامه clustalw و espript2.2. انجام و درخت فیلوژنیک با استفاده از متد neighbor- joining و با نرم افزار mega 4.0.2 رسم گردید. مدل ساختار سه بعدی پروتیین با استفاده از برنامهmodeller بر اساس berovin و aequorin ایجاد شد.