ساخت پلاسمید حاوی Large T Antigen کوتاه شده و مبدا همانندسازی ویروس 40sv و ارزیابی قابلیت تکثیر این پلاسمید در رده سلولی 293hek و Cho

هدف از این مطالعه طراحی و ساخت پلاسمیدی با مبدا همانندسازی 40sv و ژن جهش یافته ltag ویروس 40sv جهت دستیابی به ناقلی ایمن است که بتواند به صورت اپی زومال کاملا توسط عنصرهای ترانس سلول‌های یوکاریوتی شناسایی، همانندسازی شود و قدرت اتصال به پروتیین‌های 53p و rb را نداشته باشد تا به توان از آن در ژن درمانی و تولید پروتیین‌های نوترکیب استفاده نمود.جهش‌های مناسب برای ایجاد ltag ایمن با استفاده از نرم افزار modeller بررسی و در نهایت دو نوع جهش مناسب در توالی نوکلیوتیدی ژن ltag با روش pcr ایجاد و ژن جهش یافته ltag درپلاسمید egfp-2esir کلون شد. تمام کلون‌ها با روش pcr‌، هضم آنزیمی و تعیین توالی بررسی گردیدند. سلول‌های 293hek و och با سازه نهایی ترانسفکت و با میکروسکوپ فلورسانت به مدت چهل روز مشاهده شدند. از سلول‌های باقی مانده پلاسمید و dna ژنومیک تخلیص و بر روی آن‌ها pcrهای همپوشان به منظور اثبات حلقوی بودن پلاسمیدها انجام شد.نتایج حاصل از pcr، هضم آنزیمی و تعیین توالی همگی تایید کننده صحت انجام سازه و نتایج حاصل از ترانسفکشن سلول‌های 293hek و cho نشان گر همانندسازی پلاسمید در سلول‌های فوق می‌باشد.