مطالعه فلور میکروبی روده جوجه های محلی برای یافتن پروبیوتیک های باسیلوس سوبتلیس و باسیلوس کوآگولانس و بررسی تاثیر آن بر بیان ژن های بیماری زای ctxm و luxs در جدایه های بیماری زای اشریشیاکولی

زمینه و هدف: از آنتی‌بیوتیک‌ها به‌طور گسترده‌ای در سراسر جهان استفاده می‌شود. بااین‌حال، به دلیل ظهور مقاومت آنتی‌بیوتیکی در طیف وسیعی از میکروارگانیسم‌ها، استفاده از آن‌ها در سطح جهانی دچار شکست بزرگی شده است. استفاده از پروبیوتیک‌ها به‌عنوان درمان مکمل و جایگزین برای آنتی‌بیوتیک‌ها مطرح‌شده‌اند. هدف از پژوهش حاضر بررسی اثرات پروبیوتیک‌های جداشده از مرغ‌های محلی بر بیان ژن‌های luxs, ctxm در اشریشیاکلی ‌مقاوم به درمان بود.روش کار: 300 نمونه مدفوعی در فاصله اردیبهشت تا مهرماه سال 1399 از بیماران مراجعه‌کننده به بیمارستان امام خمینی تهران اخذ شد و با محیط‌های کشت اختصاصی و آزمایش‌های بیوشیمیایی نمونه‌های اشریشیاکلی جداسازی شد و سپس توسط pcr با پرایمرهای اختصاصی وجود ژن‌های luxs و ctxm مورد شناسایی قرار گرفت. جهت استخراج سویه‌های بومی باسیلوس کوآگولانس و باسیلوس سوبتلیس محتویات روده تعداد 9 قطعه جوجه محلی که هیچ آنتی‌بیوتیکی مصرف نکرده بودند کشت، جداسازی و توسط روش‌های بیوشیمیایی و pcr شناسایی شد. سویه‌های تجاری باسیلوس سوبتلیس و باسیلوس کوآگولانس برای مقایسه اثرات با باکتری‌های بومی خریداری شده و در ادامه این سویه‌ها در کشت هم‌زمان با سویه‌های اشریشیاکلی مقاوم به درمان حاوی ژن‌های ctxm و luxs قرار گرفتند. جهت بررسی تاثیر این پروبیوتیک‌ها بر بیان ژن‌ها از ریل تایم pcr استفاده شد.یافته ها: از 300 نمونه مدفوعی گرفته‌شده 40 جدایه(7.5 درصد) اشریشیاکلی به دست آمد؛ که 13 نفر از نمونه‌ها(32.5 درصد) مربوط به بیماران سرپایی و 27 نفر را(67.5 درصد) بیماران بستری تشکیل می‌دادند. همه ایزوله‌ها از زنان و مردان با رنج سنی بین 21 تا 62 سال جداشده بودند. 4 سویه اشریشیاکلی جداشده از بیماران حامل ژن‌های ctxm, luxs, بودند. جداسازی باسیلوس کوآگولانس و باسیلوس سوبتلیس از نمونه‌ها با آزمایش‌های بیوشیمیایی و مولکولی تائید شد.‌‌‌‌‌‌‌‌ سویه تجاری باسیلوس کوآگولانس بیان ژن‌های، ctxm, luxs را به ترتیب به میزان 3.3‌‌‌‌‌‌‌‌‌، 7.2‌‌‌‌‌‌‌‌‌ برابر کاهش و سویه بومی بیان این ژن‌ها را به ترتیب 3.6‌‌‌‌‌‌‌‌‌، 2.2‌‌‌‌‌‌‌‌‌ برابر نسبت به گروه کنترل در باکتری اشریشیاکلی کاهش داد. نتایج آنالیز آماری نشان داد که بین حضور پروبیوتیک‌های بومی و تجاری موجود درکشت و کاهش بیان ژن‌های ctxm و luxs ارتباط ‌معنی‌داری وجود دارد.نتیجه‌‌‌‌‌‌‌‌‌گیری‌‌‌‌‌‌‌‌‌: مصرف مکمل باسیلوس کوآگولانس و باسیلوس سوبتلیس با کم کردن بیان ژن‌های مقاومت باعث افزایش تاثیر آنتی‌بیوتیک‌ها بر اشریشیاکلی مقاوم به درمان می‌شوند.

isolation and identification of bacillus subtilis and bacillus coagulans from intestines of local chickens and its effect on ctxm and luxs gene expression in escherichia coli pathogenic isolates

inroduction objective: the aim of this study was to investigate the effects of probiotics isolated from local chickens on the expression of luxs, ctxm genes in resistant escherichia coli. material and methods: biochemical tests of escherichia coli samples were isolated and then the presence of luxs and ctxm genes was detected by pcr with specific primers. in order to extract the native strains of bacillus coagulans and bacillus subtilis, the intestinal contents of 9 local chickens were cultured, isolated and identified by biochemical and pcr methods.results: commercial strains of bacillus subtilis and bacillus coagulans were isolated along with isolates of resistant escherichia coli strains containing ctxm and luxs genes. real-time pcr was used to evaluate gene expression. from 300 fecal samples taken, 40 isolates(7.5%) of escherichia coli were obtained; four escherichia coli strains were isolated from patients carrying ctxm and luxs genes. isolates of bacillus coagulans and bacillus subtilis were confirmed by molecular experiments. decreased by 2.2 times, equal to the control group in escherichia coli.conclusion: the results of statistical analysis showed that there was a significant relationship between the presence of native and commercial probiotics in culture and reduced expression of ctxm and luxs genes.