ارزیابی ایمنی زایی حاملین نانوذرات plga حاوی آنتی ژن لیپوپلی ساکارید دتوکسیفیه شده کلبسیلاپنومونیه k2o1 در مدل عفونت ریوی موش balb/c

زمینه و هدف: کلبسیلاپنومونیه شایع‌ترین باکتری بیماری‌زا در جنس کلبسیلاها است. سالیانه مرگ حدود 2 میلیون کودک کمتر از 5 سال از پنومونی گزارش می‌گردد. هم چنین کلبسیلاپنومونیه عامل ایجاد پنومونی و عفونت‌های مجاری ادراری، در بیماران با اختلال در سیستم ایمنی و جزء عفونت‌های بیمارستانی است. به دلیل مقاومت اکتسابی و ذاتی کلبسیلاپنومونیه جداشده در برابر طیف گسترده‌ای از آنتی‌بیوتیک‌ها، به نظر می‌رسد کنترل و درمان آن حیاتی است. هدف مطالعه حاضر استفاده از نانو ذرات poly lacticcoglycolic acid (plga) در طراحی واکسن با آنتی‌ژن دتوکسیفیه شده لیپوپلی‌ساکارید کلبسیلاپنومونیه k2o1 در مدل عفونت ریوی موش balb/c است.روش کار: در مطالعه حاضر آنتی‌ژن لیپوپلی‌ساکارید از سویه کلبسیلاپنومونیه به روش سانتریفیوژ با دور بالا استخراج و توسط فنل داغ سم‌زدایی گردید. سپس آنتی‌ژن لیپوپلی‌ساکارید با نانو ذرات پلی لاکتیک کو گلیکولیک اسید کونژوگه شدند. از روش طیف‌سنجی(ft-ir) مادون‌قرمز و(afm) میکروسکوپ نیروی اتمی برای تائید انجام کونژوگاسیون با نانو ذرات استفاده شده است. برای بررسی اندوتوکسین واکسن طراحی‌شده از روش بررسی کیت(l.a.l) لیمولوس آمیبوسیت لیسیت تست و برای کنترل تب بر روی خرگوش و میزان مرگ‌ومیر بر روی موش‌ها بررسی گردید. موفقیت کونژوگه‌های آنتی‌ژن و نانو ذرات بر اساس اندازه و شارژ نانو ذرات حاوی آنتی‌ژن تائید شد.یافته ها: نتایج ft-ir و شکل پیک‌های مربوطه حضور گروه‌های عاملی آنتی‌ژن در ساختار نانوذره و تشکیل پیوند استری را تائید کردند. تصاویر حاصل از میکروسکوپ نیرواتمی نانو ذرات حاوی آنتی‌ژن لیپوپلی‌ساکارید و نانو ذرات قبل از کونژوگاسیون ، افزایش سایت‌های اتصالی نانو ذرات رانشان دادند. تغییر از حالت تیزی اولیه به پفکی پس از انجام کونژوگاسیون موفقیت حمل آنتی‌ژن توسط نانو ذرات را اثبات کرد. مشاهده نشدن تب در خرگوش و مرگ‌ومیر در موش‌ها اثبات گردید.نتیجه گیری: نتایج حاصل موثر بودن واکسن را در ایمنی‌زایی نشان دادند و بنابراین به‌عنوان کاندیدای واکسنی مناسب علیه بیماری‌های ناشی از کلبسیلاپنومونیه در مرحله اول کارآزمایی بالینی پیشنهاد می‌گردد.

Immunogenical Evalution of PLGA Nanoparticles Contain Klebsiella pneumoniae K2O1 Detoxified Lipopolysaccharide Antigen in Pulmonary Infection Model of BALB/C Mice

Inroduction Objective: Klebsiella pneumoniae is the most common pathogenic bacterium in the genus Klebsiella. Every year, about 2 million children under the age of 5 die from pneumonia. Due to the acquired and inherent resistance of Klebsiella pneumoniae isolated against a wide range of antibiotics, its control and treatment appear to be critical. The aim of the present study was to use Polylacticcoglycolic acid (PLGA) nanoparticles in vaccine design the LPS antigen of Klebsiella pneumoniae K2O1. So far, no work has been done on this strain of bacteria to make the PLGALPS vaccine. In the study, the results obtained from the tested mice showed that the mice were vaccinated. Immunized and titrated antibodies of IgM 315 cfu / well, IgG 321 cfu / well, and SIgA 365 cfu / well, elevated and in mice with invasion factor in patients and spleen and lung tissues, number of people compared to unvaccinated mice Is. Has gone to zero.Material and Method: In the present study, the LPS antigen was extracted from Klebsiella pneumoniae K2O1 by centrifugation and detoxified with phenol.Then the LPS antigen was conjugated to polylacticcoglycolic acid nanoparticles. Infrared spectroscopy (FTIR) and atomic force microscopy (AFM) were used to confirm conjugation with nanoparticles. To evaluate endotoxin of the vaccine designed Tested by Limolus amoebocyte lysate assay (LAL test). success of antigen and nanoparticles conjugates based on the size and charge of antigencontaining nanoparticles was confirmed by the zetasizer.Results: FTIR results the shape of the corresponding peaks confirmed the presence of antigenfunctional groups in the nanoparticle structure and the formation of bonds. AFM microscopic images of nanoparticles containing LPS antigen and nanoparticles before conjugation showed an increase in the binding sites of nanoparticles after conjugated. Change from initial sharpness to puffiness after conjugation proved the success of antigen transport by nanoparticles. Fever was not observed in rabbits and mortality was confirmed in BALB/C mice.Conclusion: The results showed that the vaccine was effective in immunogenicity and therefore suggested as a candidate for an effective vaccine against Klebsiella pneumoniae.