development of a polyclonal antibody against the coat protein of prunus necrotic ring spot virus

The prunus necrotic ring spot virus (pnrsv) poses a significant threat to the global stone fruit industry. in this study, samples suspected of pnrsv infection were gathered from iran’s primary stone fruit-growing areas. the coat protein (cp) gene of the isolates was amplified, and the nucleic acid and amino acid sequences of the pnrsvs were determined. phylogenetic analysis revealed that these isolates belonged to the pv-96-ii, a prominent group of pnrsvs found worldwide. an isolate from this clade was chosen to express the cp gene in escherichia coli. the cp gene of this isolate was cloned into the pet28 vector for expression, and the resulting coat protein was purified as a native protein using ni-nta agarose. the purified protein served as a recombinant antigen to generate anti-pnrsv-cp antiserum in rabbits. purified anti-pnrsv-cp igg and conjugated igg showed specificity and sensitivity, successfully detecting expressed cp and pnrsv isolates in infected stone fruit trees through various serological and sero-molecular techniques such as plate-trapped antigen enzyme-linked immunosorbent assay (pta-elisa), double antibody sandwich-elisa (das-elisa), and western blotting. these antibodies can be valuable in virus and plant screening studies, as well as serological and sero-molecular tests. this study represents the first documentation of a polyclonal antibody preparation against the cp of an iranian pnrsv isolate, offering potential assistance in controlling and preventing this economically significant virus in the future.

تولید آنتی بادی چند همسانه ای علیه پروتئین پوششی ویروس لکه حلقوی نکروتیک هسته داران

ویروس لکه حلقوی نکروتیک هسته داران (prunus necrotic ring spot virus) تهدید مهم و قابل توجهی برای درختان هسته دار در دنیا است. در این مطالعه، نمونه‌های مشکوک به آلودگی pnrsv از مناطق مهم و اصلی کاشت درختان هسته دار در ایران جمع آوری شدند. ژن پروتئین پوششی (cp) جدایه ها در ازمون پی­سی­آر تکثیر شد و قطعات تکثیر یافته تعیین توالی شدند. تجزیه تحلیل تبارزایی نشان داد که این جدایه­ها به گروه pv-96-ii تعلق دارند که یک گروه مهم  از  pnrsvها در سراسر جهان هستند. یک جدایه از این گروه برای بیان ژن  پروتئین پوششی در e. coli  انتخاب شد. ژن cp این جدایه به وکتور pet28 برای بیان همسانه سازی شد و پروتئین پوششی بیان شده  با روش native با استفاده از ستون ni-nta  خالص سازی شد. پروتئین خالص شده به عنوان یک آنتی‌ژن برای تولید آنتی سرم علیه پروتئین پوششی  pnrsv  در خرگوش‌ها استفاده شد.  igg تولید شده علیه  pnrsv-cp  تخلیص شده و igg کانژوگه شده حساسیت و اختصاصیت لازم  را نسان دادند و با موفقیت cp بیان شده و جدایه های pnrsv را در درختان میوه های هسته دار آلوده از طریق تکنیک‌های مختلف سرومولکولی و سروولوژیکی از جمله آزمون pta-elisa،   das-elisaو وسترن بلات ردیابی شدند. این آنتی بادی‌ها می‌توانند در مطالعات ردیابی ویروس در گیاه، و همچنین آزمایش‌های سروولوژیکی و سرومولکولی قابل استفاده باشند. این مطالعه نخستین مطالعه ای است که در مورد تهیه آنتی بادی  چند همسانه ای در برابر cp جدایه ی pnrsv ایرانی صورت گرفته است و در کنترل و پیشگیری از این ویروس مهم اقتصادی در آینده کمک خواهند نمود.