تاثیر افزودن روغن بذر گل مغربی به رقیق‌کننده انجمادی بر پایه تریس بر کیفیت اسپرم قوچ رومانوف پس از انجماد و یخ‌گشایی

سابقه و هدف: تحقیقات نشان داده اند که فرآوری و انجماد با تولید رادیکال‏های آزاد سبب کاهش جنبایی، زنده‏مانی و قدرت باروری اسپرم می‌‌شود. بنابراین استفاده از یک ترکیب با ویژگی آنتی‌اکسیدانتی طی این فرآیند ضروری به‌نظر می‌رسد. روغن بذرگل‌ مغربی به‌دلیل داشتن ترکیبات فنولی دارای ویژگی آنتی‌اکسیدانتی است. هدف از پژوهش حاضر، بررسی اثر افزودن روغن بذر گل مغربی به رقیق‌کننده انجمادی بر کیفیت اسپرم قوچ پس از فرآیند انجماد و یخ‌گشایی است.مواد و روش‌ها: در این تحقیق از منی 5 راس قوچ رومانوف بالغ با میانگین سنی 3 تا 4 سال و میانگین وزنی 60 تا 65 کیلوگرم استفاده شد. جمع‌آوری منی با استفاده از واژن مصنوعی به‌صورت هفته‌ای دو بار انجام گرفت. برای افزودن روغن به گروه‌های تیماری از تویین-80 استفاده شد. تیمار‌های آزمایشی شامل تیمار شاهد بدون روغن گل مغربی، تیمار 1 دارای 25 میکرولیتر، تیمار 2 دارای 50 میکرولیتر و تیمار 3 دارای 100 میکرولیتر از روغن گل مغربی بود. نمونه‌های منی پس از جمع‌آوری به آزمایشگاه منتقل شد و ازنظر حجم، غلظت و جنبایی پیش‌رونده اسپرم‌ بررسی شدند. درنهایت، نمونه‌های منی با رقیق‌کننده بر پایه تریس _ لستین سویا رقیق‌سازی و منجمد شد. پس از یخ‌گشایی فراسنجه‌های جنبایی کل و پیش‌رونده، درصد زنده‌مانی، یکپارچگی غشاء، فعالیت میتوکندریایی و پراکسیداسیون لیپیدی اسپرم تعیین گردید. یافته‌ها: نتایج نشان داد که سطح 25 میکرولیتر روغن بذر گل مغربی توانست جنبایی کل اسپرم را نسبت به گروه کنترل بهبود ببخشد و در دیگر تیمارهای آزمایشی تفاوت معنی‌داری نسبت به گروه شاهد مشاهده نشد. در فراسنجه جنبایی پیش‌رونده بین تیمارهای 25 و 50 میکرولیتر با گروه شاهد تفاوت معنی‌داری مشاهده نشد ولی این فراسنجه در تیمار 100 میکرو لیتر نسبت به گروه‌های دیگر به‌طور معنی‌داری تفاوت نشان داد (0/01> p)افزودن سطوح 25 و 50 میکرولیتر روغن گل مغربی به رقیق‌کننده، صفت یکپارچگی غشا را نسبت به سطح 100 میکرولیتر و تیمار شاهد بهبود داد (0/01> p)ولی این بهبود در تیمار 25 میکرولیتر نسبت به سطح 50 میکرولیتر بیشتر بود (0/01>p). نتایج حاصل از ارزیابی فعالیت میتوکندری نشان داد که بیشترین درصد اسپرم دارای میتوکندری فعال در گروه‌های 25 و 50 میکرولیتر بود (0/01>p). نتایج حاصل از پر اکسیداسیون لیپیدی نشان داد که کمترین مقدار تولید مالون دی آلدئید مربوط به تیمار 25 میکرولیتر می‌باشد ولی با تیمار شاهد اختلاف معنی‌داری مشاهده نشد. نتایج حاصل از آزمایش آپوپتوز نشان داد که افزودن سطوح 25 و 50 میکرولیتر روغن گل مغربی باعث کاهش میزان آپوپتوز نسبت به گروه شاهد و سطح 100 میکرولیتر روغن گل مغربی گردید (01/0>p) .همچنین زنده‌مانی در تیمار 25و 50 میکرولیتر نسبت به دیگر تیمارها به‌طور معنی‌داری بالاتر بود (0/01>p). درنهایت اسپرم‌های مرده در تیمار 25 میکرو‌لیتر نسبت به دیگر گروه‌های آزمایشی کمتر بود و همین امر سبب اختلاف معنی‌دار این صفت در این سطح نسبت به دیگر سطوح گردید (0/01>p). نتیجه‌‌گیری: به‌طورکلی افزودن روغن گل مغربی در رقیق‌کننده انجمادی منجر به افزایش جنبایی، قابلیت زنده‌مانی و سلامت غشاء پلاسمایی و کاهش آپوپتوز اسپرم‏ها پس از انجماد-یخ‌گشایی می‌شود. با در نظر گرفتن همه فراسنجه‌های اندازه‌گیری شده، گروه مربوط به 25 میکرولیتر نسبت به سایر سطوح اثر حفاظتی بیشتری از خود نشان داد.

the effect of adding evening primrose (oenothera biennis) seed oil to tris extender on ram semen quality after freeze-thawing process romanov

background and objectives: studies had shown that excessive production of free radicals during sperm processing decreases its quality parameters including motility, viability, and fertilizing ability. therefore, it seems necessary to use a compound with antioxidant properties during this process. evening primrose oil has antioxidant properties due to its phenolic compounds. the purpose of this research is to investigate the effect of adding evening primrose seed oil to freezing diluent on the quality of ram sperm after freezing and thawing process.materials and methods: in this research, the semen of 5 adult romanov rams with an average age of 3 to 4 years and average weight of 60 to 65 kg were used. semen collected using artificial vagina from trained rams twice a week. the treatments included control (without evening primrose seed oil), treatment 1 with 25 microliters epso, treatment 2 with 50 microliters epso, treatment 3 with 100 microliters epso. the collected semen sample to laboratory and examined in terms of volume, concentration and motility. semen samples were diluted with a diluent based on tris- lecithin soy and frozen. after thawing, parameters of general mobility and progressive mobility and other parameters related to mobility were evaluated. the survival percentage, membrane integrity, mitochondrial activity and peroxidation were determined.results: the results showed that the level of 25 microliters of evening primrose seed oil improve the motility of the whole sperm compared to the control group, and no significant difference was observed in other experimental treatments compared to the control group. there was no significant difference between the 25 and 50 microliters treatments with the control group in the progressive parameter, but there was a significant difference with the 100 microliters treatment compared to the other treatments and the control treatment(p<0.01).the results of lipid peroxidation showed that the lowest amount of malon-di-aldehyde production was related to the 25 microliters treatment but no significant difference was observed with the control treatment. the results of the apoptosis test showed that the addition of levels of 25 and 50 microliters of evening primrose seed oil decreased the amount of apoptosis compared to the control group and the level of 100 microliters of evening primrose seed oil(p<0.01). also, survival in the treatment of 25 and 50 microliters compared to others the treatments had a significant difference and increased survival(p<0.01). and finally, dead sperms in the 25 microliters treatment were less compared to other experimental groups, and this caused a significant difference in this trait compared to other levels(p<0.01).conclusion: in general, the addition of evening primrose seed oil in the freezing diluent leads to an increase in the viability and health of the plasma membrane of sperms after thawing. adding 25 microliters of evening primrose seed oil to the diluent caused a significant difference in the parameters of lipid peroxidation and apoptosis compared to the control treatment.