مطالعه تغییر سطح رونویسی ژن بتا-کاتنین در رده سلول سرطانی پانکراس panc-1 تحت تیمار عصاره میخک

توسعه سرطان پانکراس یک فرآیند بیولوژیکی پیچیده است که در آن ژن‌های مختلفی درگیر هستند. مسیر پیام رسانی β-catenin /wnt نقش مهمی در ایجاد سرطان پانکراس دارد. در این پژوهش تاثیر عصاره حاوی پلی‌فنل میخک بر رده سلولی سرطانی پانکراسpanc-1  و بررسی تغییرات بیان ژنی β-catenin  مورد ارزیابی قرار گرفت. رده سلولی سرطانی پانکراس panc-1 از مرکز رویان اصفهان خریداری شد. پس از پاساژ‌های متوالی به منظور انجامmtt assay، سلول‌ها در پلیت کشت 96 خانه کشت داده شد و تیمار 24 ساعتی با غلظت‌های مختلف عصاره گیاه میخک انجام گردید و  میزان جذب نمونه‌ها در طول‌موج 570 nm مشخص شد. با تفسیر نتایج حاصل از آزمون mtt، میزان ic50 عصاره میخک تعیین گردید. بر اساس ic50، کشت سلول‌های panc1 تحت تیمار با عصاره و بدون تیمار (کنترل) انجام شد و سپس با استفاده از کیت، استخراج rna و سنتز cdna از سلول‌ها صورت گرفت. با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن β-catenin و نیز ژن مرجع actin، ریل تایم pcr انجام و سپس با روش 2-δδct تفسیر گردید. ترکیبات موجود در عصاره میخک نیز با روش gc mass تعیین شد. نتایج حاصل از mtt assay نشان داد که ic50 عصاره میخک در رده سلولی panc1 در محدوده mg/ml 10 است و با افزایش غلظت عصاره میخک، بقای سلولی سیر کاملا نزولی دارد. بررسی میزان تغییر رونویسی ژن β-catenin تحت تیمار غلظت ic50 عصاره میخک نیز نشان داد که این عصاره قادر است در سطح معنی‌دار 0/05

studying the change in transcription level of beta-catenin gene in panc-1 pancreatic cancer cell line treated with clove extract

pancreatic cancer development is a complex biological process in which various genes are involved. the β-catenin/wnt signaling pathway plays an important role in the development of pancreatic cancer. in this research, the effect of clove polyphenol extract on panc-1 pancreatic cancer cell line and the changes in β-catenin gene expression were evaluated. panc-1 pancreatic cancer cell line was purchased from the royan center of isfahan. after successive passages in order to perform mtt assay, the cells were cultured in 96-well culture plates and treated for 24 hours with different concentrations of clove plant extract, and the absorbance of the samples was determined at a wavelength of 570 nm. by interpreting the results of the mtt test, the ic50 value of clove extract was determined. based on ic50, panc1 cells were cultured under treatment with extract and without treatment (control), and then using the kit, rna extraction and cdna synthesis were done from the cells. using specific primers for β-catenin gene and actin reference gene, real-time pcr was performed and then interpreted by 2-ddct method. the compounds in clove extract were also determined by mass gc method. the results of mtt assay showed that the ic50 of clove extract in panc1 cell line is in the range of 10 mg/ml and with increasing concentration of clove extract, cell survival is completely decreased. examining the transcriptional change of β-catenin gene under the treatment of ic50 concentration of clove extract also showed that this extract is able to decrease the expression of this gene by 1.29 times at the level of transcription at a significant level of p<0.05, which due to the unconventional increase of β-catenin catenin in all types of cancer, reducing the expression of this gene under the treatment of clove extract can be desirable.