ترانسفورماسیون برنج (Oryza sativa L.) با ژن‌های گزینشگر هایگرومایسین (hpt) و گزارشگر بتاگلوکورونیداز(gus) به روش in planta

گیـاهان تراریختـه اغلب به وسیله روش هایی بر پایه کشت بافت تولید می شوند که روش های پیچیـده ای بوده و نیاز به آماده سـازی و انتخـاب دقیق ریزنمونه، انتخاب بافت های تراریخت شده و باززایی گیاهان تراریخته در شرایط in vitro را دارند. در این آزمایش، گیاهان تراریخته در شرایط غیر استریل تولید شدند. بدین منظور بذور دو رقم برنج بومی تیپ ایندیکا خیسانده شدند تا جنین فعال و شروع به رشد کند. سپس منطقه جنینی با حداقل آسیب به جنین زخم‌زنی و با دو سویه اگروباکتریوم تومه فاشیینس (agrobacterium tumefaciens) حامل ناقل pcambia1105. 1r تلقیح شدند. القا ژن‌های vir در محیط کشت خاصی که بدین منظور طراحی شده است انجام شد. بذور بعداً جوانه‌زده و در تحت شرایط غیر استریل رشد کردند. تایید الحاق ژن انتقالی به درون ژنوم گیاهان تراریخته نسل t0 و t1 با استفاده از روش pcr شامل دو ژن در داخل منطقه t-dna، مقاومت بافت برگی به آنتی‌بیوتیک هایگرومایسین و آزمون بافت شیمیایی gus انجام شد. بیشترین کارایی ترانسفورماسیون در نسل t0 مربوط به تیمار زخم‌زنی به وسیله خراش با اسکالپل آغشته به اگروباکتریوم به میزان 72/11 درصد در رقم هاشمی 75/9 درصد بوده است. کارایی ترانسفورماسیون در رقم هاشمی در شرایط سوزن‌زنی همراه با خلا نیز به طور معنی‌داری از تلقیح تحت شرایط غیرخلا بیشتر بوده است. به منظور بررسی پایداری ژن تراریخته گیاهان نسل t1 به طریق مشابه نسل t0 آنالیز مولکولی شده و نتایج نشان داد که همچنان 19 درصد گیاهان نسل t1 تراریخت بوده‌اند.