استاندارد کردن pcr تشخیصی به‏ وسیله اینترنال کنترل تکثیری

مقدمه: بروز نتایج متفاوت در آزمایشگاه‏ها به علت استاندارد نبودن، از معایب روش‏‏‏‏های تکثیر مولکولی است. در بیشتر مقالات چاپ شده در زمینه تشخیص pcr عوامل عفونی، ‏اینترنال کنترل تکثیری (ic) وجود ندارد. هدف از پژوهش حاضر، طراحی و توسعه یک روش ساده و سریع، برای‏‏‏‏‏‏ ساخت اینترنال کنترل آزمون‏‏ pcr ‏در آزمایشگاه‏های ‏تشخیصی است. ‏مواد و روش‏‏ها: در پژوهش حاضر، برای ساخت اینترنال کنترل رقابتی، از پرایمرهای مرکب و روش pcr-cloning استفاده شد‏‏. بدین ترتیب که پرایمرهای جلویی و عقبی تشخیص pcr ویروس هپاتیت) ‏(hbv، ویروس هرپس سیمپلکس ‏hsv))، مایکوباکتریوم توبرکلوزیس (mtb)،‏‏ مایکوپلاسما پنومونیه (mpn)،‏‏ کریپتوکوکوس نئوفورمنس ‏(cne)،‏‏ جنس سالمونلا (sal. sp) و جنس مایکوپلاسما (m. sp) را در بخش '5 پرایمرهای ژن کینتوپلاست لیشمانیا، به شکل‏‏ دم طراحی و سنتز شد. اینترنال کنترل‏های تکثیری با پلاسمید ptz57r الحاق و در باکتری اشریشیاکلی jm107 ترانسفورم شد‏‏. تعداد حداقل ic در هر واکنش pcr از طریق رقیق‏سازی ‏‏‏‏و همین‏طور طیف پاسخ pcr همراه با ic بررسی شد‏‏‏‏‏‏‏‏‏. ‏نتایج: hbv–hsv–mtb–mpn–cne–sal. sp– و m. sp با پرایمر‏های اختصاصی به ترتیب برابر با 272bp-284bp-415bp-345bp-245bp-454bp-262bp و محصول اینترنال کنترل هم به ترتیب672bp-668bp-661bp-669bp-660bp-662bp-660bp جفت باز بود، که از نظر اندازه، اختلاف مطلوبی بین محصول pcr و ic وجود دارد و به آسانی در ژل قابل تفکیک است. تعداد حداقل ic در هر واکنش، 1000 عدد تعیین شد. حداقل و حداکثر حساسیت آزمون‏‏ pcr همراه با ic برای همه عوامل در حد مطلوبی به دست آمد. در آزمون‏‏ ویژگی با عوامل مختلف هم، هیچ محصول ناخواسته‏ای ‏مشاهده نشد. ‏بحث و نتیجه‏گیری: نتایج منفی و مثبت کاذب که به علت‏های‏‏‏ مختلف در روش‏‏‏ pcr رخ می‏دهد از مشکلات مهم این روش‏‏‏ جذاب است‏‏‏. استفاده از یک اینترنال کنترل در تشخیص مولکولی به عنوان کنترل داخلی، می‏‏تواند این خطاها را شناسایی کند. ‏