کلونینگ و بیان ژن کد‏کننده آنزیم لاکاز از باکتری باسیلوس پومیلوس سویه GAZ23

مقدمه: لاکازها (بنزن دیول اکسیژن اکسیدو ردوکتاز ec 1. 10. 3. 2) یکی از اعضای خانواده مالتی کوپر اکسیدازها هستند که اکسیداسیون طیف گسترده ای از ترکیبات فنولی را با استفاده از اکسیژن مولکولی کاتالیز می‌کنند.مواد و روش‏‏ها: ژن کد‏کننده آنزیم لاکاز از سویه gaz23 به‏وسیله پرایمرهای کلونینگ اختصاصی ژن تکثیرشد. محصول pcr در ناقل بیانی (pet21a) کلون به باکتری اشریشیا کلی سویه bl21(de3) انتقال یافت و تحلیل توالی انجام شد. بیان آنزیم با استفاده از سوبسترای معمول لاکاز abts سنجیده شد.نتایج: توالی ژن s rdna16 سویه بومی gaz23 که از خاک‏های ایران جدا شده است دارای 100 درصد شباهت به باکتری باسیلوس پومیلوس بود. ژن لاکاز در سویه gaz23 دارای 1533 نوکلیوتید است که 510 آمینواسید را کد می‏کند.بحث و نتیجه‏گیری: ژن لاکاز سویه gaz23 دارای 67 درصد شباهت آمینواسیدی به پروتیین cota باکتری باسیلوس سوبتیلیس است. به منظور به دست آوردن مقادیر بالای پروتیین محلول، بیان، تحت شرایط میکروآیروبیک و در دمای پایین انجام شد. 4 دمین غنی از هیستیدین متصل شونده به مس در توالی آمینواسیدی این پروتیین وجود دارد.