تشخیص مقاومت به افلوکساسین با روش مولکولی سریع Allele Specific PCR ‏در مایکوباکتریوم توبرکلوزیس

مقدمه: مقاومت به فلوروکینولون‏ها در بیماری سل رو به گسترش است. ‏تشخیص مقاومت به روش کشت خلط دو ماه به طول می‏انجامد. ‏مطالعه حاضر، به منظور طراحی روشی برای تشخیص سریع مقاومت سویه‏های کلینیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس به افلوکساسین انجام شد.مواد و روش‏‏ها: در این مطالعه، ‏dna‏های استخراج شده از 41 سویه کلینیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس ‏حساس و مقاوم ‏به افلوکساسین موجود در بانک dna مرکز تحقیقات سل و بیماری‏های عفونی با دو روش مولکولیآلل اسپسیفیک پی سی آر (as-pcr) و تعیین ترادف (سکوینس)، برای تعیین موتاسیون در منطقه مرتبط با مقاومت ژن gyra با هم مقایسه شدند. ‏پرایمرهای داخلی برای تشخیص موتاسیون‏های مرتبط با مقاومت طراحی و شرایط ‏pcr ‏تعیین شد‏. ‏قطعه مورد نظر درتعدادی از نمونه‏ها تعیین ترادف شده و به‏عنوان استاندارد طلایی با روش‏های ارایه شده مقایسه شد.نتایج: روش as-pcr ‏به خوبی قادر به تشخیص موتاسیون با تشکیل یا عدم تشکیل باند داخلی شد‏ که نشان دهنده طراحی صحیح پرایمرها بود. ‏روش as-pcr اجرا و با توجه به نتایج بسیار خوب به عنوان روش عادی استفاده شد. ‏در مجموع، ‏از 41 سویه کلونیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس مطالعه شده، ‏37 سویه از نظر فنوتیپی (‏به روش کشت proportion) مقاوم به افلوکساسین و 4 سویه حساس به این دارو بودند. ‏از 37 سویه مقاوم از نظر فنوتیپی، 32سویه با روش as-pcr مقاوم به افلوکساسین و 5 نمونه حساس تعیین شدند. ‏نتایج تعیین ترادف، ‏با نتایج روش‏های استفاده شده انطباق داشت. ‏حساسیت و ویژگی روش به ترتیب ‏معادل ‏11/86 درصد و 100 درصد به دست آمد.بحث و نتیجه‏گیری: نتایج مطالعه حاضر نشان می‏دهد که روش as-pcr طراحی شده می‏تواند به عنوان یک روش ساده و سریع برای تعیین حساسیت و مقاومت به افلوکساسین در سویه‏های مایکوباکتریوم توبرکلوزیس استفاده شود. ‏این روش تا کنون در منابع علمی گزارش نشده است.