جداسازی سویه باسیلوس g362 نمک‌دوست نسبی از چشمه‌ آب گرم گراب در شمال شرق ایران و تعیین خصوصیات اندوگلوکاناز پایدار در حرارت و طیف وسیع ph آن

پایداری آنزیم‌ها به حرارت و ph از مهم‌ترین شاخصه‌های تعیین‌کننده در کاربرد آنهاست. در این تحقیق دستیابی به سلولاز پایدار در برابر حرارت و ph، با غربالگری در یکی از چشمه‌های گراب واقع در شمال شرق ایران هدف‌گذاری شد.نمونه‌های جمع‌آوری‌شده از یکی از چشمه‌‌های آب گرم گراب، در استان خراسان رضوی در ایران، برای جداسازی، ارزیابی و شناسایی باکتری‌های قادر به تولید سلولاز پایدار در برابر حرارت استفاده شدند. کشت‌ها در دمای 45 درجه سانتی‌گراد و در شرایط هوازی گرمخانه‌گذاری و جدایه‌ها روی محیط cmc آگار جداسازی شدند. غربالگری اولیه جدایه‌ها مبتنی بر محیط کشت اختصاصی، تحمل‌پذیری به نمک و دما انجام شد. سپس غربالگری تکمیلی آنها با ارزیابی فعالیت اندوگلوکانازی در دماها و ph مختلف به روش کیفی و کمی سنجش انجام شد. در نهایت، شناسایی مولکولی جدایه‌ انتخابی با روش تعیین توالی ژن 16s rrna انجام شد. نتایج حاصل از این تحقیق منجر به معرفی سویه انتخابی نمک‌دوست نسبی با نام انتسابی g362 bacillus sp. با پایداری قابل توجه فعالیت اندوگلوکانازی در دمای 55 درجه سانتی‌گراد و پایداری در طیف وسیعی از  ph اسیدی و قلیایی شد. چشمه‌ مطالعه‌شده مانند برخی از چشمه‌های آب گرم ایران دارای باکتری مولد سلولاز است که سویه منتخب این تحقیق، با قابلیت رشد در نمک 6 درصد و تولید آنزیم اندوگلوکاناز مقاوم به حرارت و پایداری عملکردی بالا در طیف وسیع  phقلیایی و اسیدی می‌تواند برای مطالعات بیشتر به کار گرفته شود. علاوه بر این، ژن اختصاصی اندوگلوکاناز جدایه g362 bacillus sp. را می‌توان شناسایی مولکولی کرد و برای تحقیقات بیشتر از جمله مطالعات ساختاری استفاده نمود. حتی ممکن است به‌عنوان یک الگوی پروتئین در مهندسی پروتئین استفاده شود.

isolation of a moderately halophilic bacillus sp. g362 from garab hotspring in northeastern iran and characterization of thermostable, broad range, and ph-stable of its endoglucanase

the stability of enzymes to heat and ph is one of the most important determining factors in their application. in this research, achieving thermostable and ph-stable cellulase was aimed by screening in one of the hot springs of garab in northeast iran. the samples collected from one of the hot springs of garab, in razavi khorasan province in iran, were used to isolate, screen, and identify bacteria capable of producing thermostable cellulase. the cultures were cultured at 45°c and under aerobic conditions. the bacteria were isolated on a cmc agar medium. initial screening of the isolates was done based on specific culture medium, salt tolerance, and temperature changes. then, their additional screening was done by evaluating endoglucanase activity at different temperatures and ph using qualitative and quantitative methods. finally, the molecular identification of the selected isolate was done by 16s rrna gene sequencing. the results of this study, led to the introduction of a selected strain identified primarily as bacillus sp. g362, a moderate halophile growing in 6%(w/v) salt concentration.  it showed high endoglucanase stability at 55°c and high stability in a wide range of acidic and alkaline ph. the studied hot spring, like some other iranian hot springs, has cellulase-producing bacteria, which bacillus sp. g362 is capable of producing endoglucanase showing the thermostablity and ph stability at a wide range of alkaline and acidic ph. in addition, the specific endoglucanase gene of g362 bacillus sp. can be identified through molecular methods and used for further research including structural studies. it may even be used as a protein template in protein engineering.