اثر عصارۀ سلولی باکتری (بومی) پروبیوتیک لاکتوباسیلوس کازئی روی مرگ سلول‌های آدنوکارسینومای پانکراس (aspc-1) و بیان ژن‌های آپپتوزی bcl2، bax و dpc4

مقدمه: امروزه باکتری‌های پروبیوتیک مانند لاکتو‌باسیل‌ها به‌عنوان یکی از عوامل پیشگیری‌کنندۀ ابتلا به بسیاری از بیماری‌ها ازجمله سرطان شناخته شده‌اند. هدف مطالعۀ حاضر، بررسی آثار سمیت سلولی محلول رویی باکتری پروبیوتیک لاکتوباسیلوس پاراکازئی (ibrc_10784) روی ردۀ سلولی سرطان پانکراس  (aspc1)و آنالیز بیان ژن‌های آپپتوزی bax، bcl2 و dpc4 بود.مواد و روش‏‏ها: مطالعۀ حاضر روی ردۀ سلولی سرطانی پانکراس انجام شد و اثر محیط‌کشت و فراوردۀ لاکتوباسیلوس پاراکازئی روی بیان ژن‌های دخیل در آپوپتوز و همچنین ژن dpc4 مطالعه شد. باکتری در محیط‌کشت اختصاصی msr broth کشت داده و در انکوباتور  co2دار به‌مدت 48 ساعت گرماگذاری شد. پس از مشاهده‌ رشد باکتری، محیط‌کشت در شرایط rpm 9000 به‌مدت 5 دقیقه سانتریفیوژ و محلول رویی جدا شد. سپس با استفاده از فیلتر سرنگی، این محلول استریل و در مراحل بعدی استفاده شد. در ادامه، سلول‌های aspc1 با محلول رویی کشت باکتری تیمار 24 ساعته شدند و پس از آن، استخراج rna و ساخت cdna انجام شد. سپس واکنش qpcr انجام شد.نتایج: نتایج نشان دادند محلول رویی کشت باکتری لاکتوباسیلوس پاراکازئی می‌تواند میزان بیان ژن‌های مطالعه‌شده را تغییر دهد؛ به‌طوری‌که بیان ژن bax را 1.86 برابر نسبت به ژن رفرنس افزایش داد. همچنین، بیان ژن bcl2 را نسبت به ژن رفرنس 4.56 برابر کاهش داد. نکتۀ درخور توجه در تغییر بیان ژن dpc4 بود؛ به‌طوری‌که بیان این ژن نسبت به ژن رفرنس به مقدار 2.67 برابر افزایش یافت و این مقدار تغییر بیان، معنادار (p< 0.005) بود.بحث و نتیجه‏ گیری: مطابق با نتایج ما به نظر میرسد که افزایش بیان ژن سرکوبگر تومور  dpc4 که از عوامل ضروری در مسیر tgfβ میباشد می تواند در سرکوب سرطان پانکراس مهم باشد.

The Effects of Native Lactobacillus Paracasei Supernatant Solution on Death of Pancreatic Adenocarcinoma Cells (AsPC-1) and Expression of bax, bcl2, and DPC4 Apoptotic Genes

Introduction: Nowadays, probiotic bacteria such as Lactobacilli have been recognized as promising agents to prevent a large number of diseases, including cancer. This study aimed to evaluate the cytotoxic effects of Lactobacillus paracasei (IBRC_10784) extract on pancreatic cancer cell line ASPc1 and to analyze the expression of bax, Bcl2, and DPC4 apoptotic genes.Materials and methods: This study was conducted on ASPC1 pancreatic adenocarcinoma cell line to assess the effects of culture medium and Lactobacillus paracasei products on the expression of genes involved in apoptosis as well as DPC4 gene expression. Lactobacillus paracasei was cultured on specialized MSR broth medium and incubated for 48 hours in a CO2 incubator. After observing the growth of bacteria, the culture medium was centrifuged for 5 minutes at 9000 rpm and the supernatant was removed. Then, the supernatant was sterilized by a 0.22micron syringe filter and was used in the subsequent steps. In the next step, AsPC1 cells were treated with supernatant solution for 24 hours, followed by RNA extraction and cDNA synthesis. The QPCR reaction was performed using specific primers.Results: The findings of this research showed that the supernatant solution of Lactobacillus paracasei culture was able to change the expression of the studied genes, so that the expression of bax gene increased 1.86 times relative to the reference gene. Moreover, the expression of bcl2 gene decreased by 4.56 folds compared to the reference gene. A notable point was the changing expression of DPC4 gene, which significantly increased to 2.67 folds in comparison to the reference gene (P<0.005).Discussion and conclusion: According to the results of the present study, it seems that the increased expression of DPC4 tumor suppressor gene, which is one of the essential factors in TGFβ pathway, may be important in suppressing pancreatic cancer.