جداسازی و شناسایی اندوفیت‏های قارچی لوبیا چشم‏ بلبلی در استان خوزستان

مقدمه: اندوفیت‌ها ریزجاندارانی هستند که بدون هیچ‌گونه نشانۀ آشکاری در بافت‌های داخلی گیاهان ساکن می‏شوند. مطالعۀ حاضر با هدف شناسایی و جداسازی قارچ‌های اندوفیت لوبیا چشم‌بلبلی (vigna unguiculata (l.) walp.) در استان خوزستان انجام شد. مواد و روش‏‏ها: در سال 1395، هشت نمونۀ گیاهی سالم از مناطق مهم زیرکشت لوبیا چشم‏بلبلی در شمال استان خوزستان جمع‌آوری شدند. قطعه‌های کوچکی از ریشه، ساقه، برگ و غلاف هر نمونه ضدعفونی سطحی عمیق  و روی محیط‌غذایی سیب‌زمینی‌دکستروز‌آگار کشت شدند. 60 جدایۀ قارچی حاصل به روش تک‏اسپور خالص‏سازی و 21 جدایه بر اساس ویژگی‌های ریخت‏شناسی برای بررسی‏های مولکولی انتخاب شدند. جدایه‏ها در محیط سیب‌زمینی‌دکستروز‌براث رشد کردند و زیست‏تودۀ میسیلیومی با کاغذ صافی جمع‏آوری شد. استخراج dna با استفاده از روش ارگانیک مبتنی بر فنل و کلروفرم انجام شد. بخش‏هایی از ژن nrrna (نواحی its و 28sd1/d2) با استفاده از آغازگرهای مناسب تکثیر و سپس توالی‌یابی شدند. نتایج: جدایه‏های بررسی‌شده بر اساس ویژگی‌های ریخت‏شناسی، نتایج جستجوی blastn و فیلوژنی مبتنی بر ناحیۀ its تجزیه‌وتحلیل شدند و بر اساس آن گونه‏های alternaria destruens،alternaria sp.،curvularia mosaddeghii،curvularia sp.، fusarium chlamydosporum،f. nygamai، f. falciforme،f. proliferatum،fusarium sp.،macrophomina phaseolinaوpenicillium oxalicum شناسایی شدند. بحث و نتیجه‏گیری: جنس‏های alternaria، fusarium و curvularia فراوان‏ترین اندوفیت‏های قارچی در گیاه لوبیاچشم‏بلبلی در زیست‏بوم گرم استان خوزستان هستند. بر اساس دانش ما، این نخستین مطالعه‏ای است که حضور اندوفیتی قارچ‏های alternaria destruens،alternaria sp.، m. phaseolina، fusarium chlamydosporum،f. nygamai،f. falciforme،f. proliferatumوpenicillium oxalicum رادر گیاه لوبیا‏چشم بلبلی گزارش می‏کند.

Isolation and Identification of Fungal Endophytes of the Cowpea in Khuzestan Province

Introduction: Endophytes are microorganisms that colonize internal tissues of plants without causing obvious symptoms. This study was conducted to isolate and identify endophytic fungi of the cowpea in Khuzestan province. Materials and methods: During 2016, eight healthy samples of the cowpea plants were collected from the important areas under cultivation in the northern Khuzestan province. The small parts of the roots, stems, leaves and pods were deeply surface sterilized for each samples and plated on PotatoDextroseAgar. Sixty fungal isolates obtained in this study were purified by single spore method. Based on morphological characteristics, 21 out of 60 isolates were selected for molecular study. The isolates were grown in PotatoDextroseBroth and mycelial biomass was recovered by passing through filter paper. DNA extraction was performed using a phenol and chloroform based organic method. The parts of the nrRNA gene (ITS and 28SD1/D2 regions) were amplified using appropriate primer pair and then sequenced. Results: The isolates were analyzedon the basis of morphological characteristics in combination with BlASTn search algorithm and ITS sequencebased phylogeny. Accordingly, the isolates were identified as follows: Alternaria destruens, Alternaria sp., Curvularia mosaddeghii, Curvularia sp., Fusarium chlamydosporum, F. nygamai, F. falciforme, F. proliferatum, Fusarium sp. Macrophomina phaseolina and Penicillium oxalicum. Discussion and conclusion: Alternaria, Fusarium and Curvularia genera were the most abundant fungal endophytes into cowpea plants, growing in warm climate of the Khuzestan Province. To the best of our knowledge, this is the first study to report endophytic growth of A. destruens, Alternaria sp., M. phaseolina, F. chlamydosporum, F. nygamai, F. falciforme, F. proliferatum and P. oxalicum within cowpea plants.