طراحی و بهینه سازی روش Pcr تک واکنشی چندگانه‌ی آشیانهای به منظور غنی سازی محصول Pcr در تشخیص بروسلا

باکتری جنس بروسلا یکی از عوامل اصلی بیماریهای مشترک انسان و دام است. تشخیص گونههای بیماریزا در کشورهای مختلف حایز اهمیت است. در این بررسی سه نوع نمونه شامل باکتری خالص، شیر و سرم بیماران مشکوک به بروسلوز مورد بررسی مولکولی قرار گرفت. آزمونها روی30 نمونه خون بیمار مبتلا به بروسلوز و همچنین 100 نمونه شیر جمعآوری شده از دامداران سنتی که بهطور تصادفی انتخاب شده بود؛ انجام و برای تایید دو نمونه از محصولات واکنش pcr تعیین توالی شد. استخراج dna با بهکارگیری روش sds/net/proteinase-k و سپس فنل – کلروفرم انجام شد. وجود بروسلا ملیتنسیس در 22 مورد (3/73 درصد) بیمارانی که تستهای سرولوژی مثبت بروسلوز داشتند و 14 نمونه از شیرهای جمعآوری شده (14 درصد) تایید شد؛ هرچند مثبت بودن تستهای مولکولی در حیوانات واکسینه شده نیز باید در نظر گرفته شود. با بهکارگیری پرایمرهای اختصاصی برای تکثیر یک ناحیه از ژن omp31 گونههای مختلف بروسلا در واکنش pcr اول و در پی آن بهکارگیری پرایمر بسیار اختصاصی داخلی برای بروسلا ملیتنسیس، واکنشی با حساسیت بسیار بالا بهینهسازی شد. در پایان شرایط به گونهای طراحی گردید که تمام پرایمرها در یک واکنش به تغلیظ محصولی با طول تقریباً برابر (به ترتیب 136 و 128 جفت باز) که در ژل آگارز همپوشانی دارند، کمک کند. در مجموع، در این بررسی یک روش ساده با حساسیت بالا طراحی شد و به نظر میرسد این روش در مقایسه با روشهای دیگر ابزار مفیدی برای تشخیص بروسلوز انسانی و حیوانی در سطح آزمایشگاههای نه چندان مجهز باشد.