استفاده از روشی کارآمد برای جداسازی اسپرم‌های با تحرک کم و زیاد در منی تازه تیمار شده با resiquimod (r848) در نریان، باهدف جداسازی اسپرم‌های حامل کروموزوم x از y

هدف از مطالعه حاضر تنظیم و بهینه‌سازی روشی کارآمد برای جداسازی اسپرم‌های کم‌تحرک و پرتحرک تیمار شده با resiquimod (r848) در اسب بود، با این هدف که بتوان از این روش در تولید اسپرم تعیین جنسیت شده در اسب استفاده کرد. در مطالعه حاضر، نمونه منی تازه از سه نریان متفاوت در سه تکرار اخذ شد.  برای تعداد 30 میلیون اسپرم، فرایند swim-up در محیط htf برای مدت‌زمان 30 دقیقه انجام شد. در پایان، 5 لایة مختلف، به ترتیب از بخش بالایی محیط به سمت پایین جداسازی شدند. چهار دز 0.06 (0.06d)، 0.12 (0.12d)، 0.16 (0.16d) و 0.24 (0.24d) میکرولیتر از resiquimod با غلظت 3 میکرومولار مورد آزمایش قرار گرفتند و با گروه‌های کنترل بدون resiquimod از نظر شاخص‌های مختلف حرکتی اسپرم مقایسه شدند. دزهای 0.12d ، 0.16d و 0.24d سبب کاهش معنی‌دار در شاخص‌های مرتبط با سرعت حرکت اسپرم در اغلب لایه‌های برداشت شده شدند (p<0.05). برای دز 0.16d، شاخص vsl در لایه‌های دوم و سوم (از بالا به پایین) در گروه درمان نسبت به کنترل افزایش معنی‌دار نشان داد (p<0.05). همچنین دز 0.16d سبب کاهش معنی‌دار در شاخص‌های سرعت حرکت اسپرم در 2 لایه پایینی شد (p<0.05). در بالاترین لایه برداشت شده در این دز، میزان vsl در گروه درمان بیش از گروه کنترل بود ( p<0.05) و 2 شاخص vcl و vap اختلاف معنی‌داری بین گروه‌های کنترل و درمان نداشتند (p>0.05). در مجموع بهترین دز استفاده شده در این مطالعه که منطقی‌ترین تغییرات را در شاخص‌های حرکتی اسپرم در لایه‌های برداشت شده داشت دز 0.16d بود.

using an efficient method to separate sperms with low and high motility in fresh stallion semen treated with resiquimod (r848)، aiming to separate x and y chromosome-bearing sperms

the aim of the present study was to develop and optimize an efficient method to separate sperms with low and high motility in fresh stallion sperm treated with resiquimod (r848)، aiming to separate x and y chromosome-bearing sperms. fresh semen samples were collected from three different stallions in triplicate. for 30 million sperm، swim-up was conducted in htf medium for 30 minutes. finally، five distinct layers were separated from the top to the bottom of the medium. four doses of 0.06 (d0.06)، 0.12 (d0.12)، 0.16 (d0.16) and 0.24 (d0.24) µl of resiquimod at a concentration of 3 µm were tested and compared with control groups without resiquimod in terms of sperm motility parameters. doses d0.12، d0.16، and d0.24 induced a significant reduction in sperm velocity-related indices across most harvested layers (p<0.05). for dose d0.16، vsl in the second and third layers (from top to bottom) of the treatment group showed a significant increase compared to the control group (p<0.05). additionally، dose d0.16 caused a significant decrease in sperm motility indices in the two lower layers (p<0.05). at the highest harvested layer of this dose، the vsl in the treatment group was significantly higher than in the control group (p<0.05). however، the indices vcl and vap showed no significant differences between the treatment and control groups (p>0.05). overall، the best dose used in this study that produced the most reasonable changes in sperm motility indices in the harvested layers was d0.16.