معرفی ژن های مرجع برای تجزیه و تحلیل یافته‌های rt-qpcr در اسپرم منجمد نریان

انجماد اسپرم موجب پیشرفت های زیادی در صنعت پرورش حیوانات اهلی به خصوص از لحاظ انتشار ژن های برتر شده است و بهبود نگه دارنده ها می تواند موجب افزایش قابل ملاحظه ای در انتقال و تلقیح اسپرم های منجمد شود. در این مطالعه، ژن‌هایی ارزیابی شدند که حتماً در اسپرم منجمد شده نریان بیان می شوند و با فراهم کردن تکثیری مناسب، به عنوان ژن های مرجع در مطالعات آینده بیان ژن استفاده شوند. برای این منظور اسپرم های زنده و با تحرک بالای 70 درصد، از نمونه های تهیه شده از شش نریان مختلف انتخاب شدند. نمونه های اسپرم برای استخراج محتوی کل mrna به دو بخش تقسیم شدند، یکی به عنوان نمونه تازه و دیگری پس از انجماد و ذوب مجدد. تکثیر سه ژن منتخب l32، β actin و ubiquitin ابتدا با روش rt qpcr انجام و سپس پایداری ژنی با نرم‌افزارهای genorm و bestkeeper محاسبه شد. نتایج نشان داد که بیان ژن l32 در مقایسه با ژن های β actin و ubiquitin پایداری کمتری دارد. نرم‌افزار genorm بهترین ترکیب ژنی را ژن های β actin و ubiquitin معرفی و ارزش پایداری (m) برای بهترین ترکیب ژنی را 0.083 محاسبه کرد. با توجه به نتایج به دست آمده از نرم افزار bestkeeper، با ثبات ترین ژن خانه دار به منظور نرمال‌سازی داده های بیان ژن در آنالیز نتایج واکنش زنجیره ای پلی‌مراز در زمان واقعی، ژن β actin مشخص شد.