کلونینگ و بیان ژن کدکننده پروتئین نوکلئوکپسید ویروس سپتی‌سمی‌هموراژی ماهی قزل‌آلای رنگین‌کمان (onchorhynchus mykiss) در باکتری اشیرشیاکلی

بیماری ویروسی سپتی‌سمی‌هموراژِی (vhs) یکی از مهم‌ترین بیماری‌های ماهی قزل‌آلای رنگین کمان است که اخیراً در ایران شیوع گسترده‌ای یافته و خسارت‌های بسیار سنگینی را بر پرورش‌دهندگان تحمیل کرده است. به منظور شناسایی و اطمینان از وجود عامل بروز این تلفات، نمونه‌برداری از مزارع پرورشی استان چهارمحال و بختیاری- که کانون اصلی همه‌گیری و تلفات بالا بود- صورت گرفت. ماهیانی که علایم بالینی داشتند، انتخاب شدند و اندام‌های کلیه قدامی، طحال، قلب و مغز آن‌ها جدا و در الکل 70 درصد ذخیره گردید. بر اساس آزمایش rt-pcr، بیماری vhs تایید شد، سپس برای استفاده در بررسی سرولوژیک vhs، یک قطعه از ژن نوکلئوکپسید (n) ویروس vhs، با پرایمرهای پیشنهادی oie و اندکی تغییر، تکثیر شد و قطعه موردنظر در وکتور pmal-c2x کلون و سپس در باکتری اشیرشیاکلی rosetta بیان گردید. پروتئین بیانی با کمک ستون کروماتوگرافی رزین آمیلوز خالص گردید. پروتئین هدف با وزن kda61 از طریق sds-pageو متعاقب آن ایمونوبلاتینگ ارزیابی شد. مشاهده بیان پروتئین با وزن ملکولی قابل انتظار در sds-page و واکنش مثبت این پروتئین با سرم موش ایمن شده با پروتئین mbp در ایمونوبلات نشان دهنده بیان موفق این قطعه از پروتئین در باکتری اشیرشیاکلی بود.