جداسازی و کلونینگ ژن فیوژن (F) از ویروس سرخک سوش واکسینال (AIK C)

خلاصهمقدمه: ویروس سرخک عضو خانواده پارامیکسو ویروسها و از جنس موربیلی ویروسها است که دارای ژنوم rna با قطبیت منفی است.روش: در این طرح ابتدا اقدام به استخراج rna از محیط حاوی ویروسهای سرخک سوش واکسینال aik c که روی سلولهای mrc 5 رشد کرده بودند٬ گردید.rna استخراج شده فورا جهت ساخت cdna تک رشته ای با استفاده از واکنش نسخه برداری معکوس مورد استفاده قرار گرفت. cdna تک رشته ای بعنوان رشته الگو جهت تکثیر ژن f بوسیله پرایمرهای اختصاصی در واکنش pcrاستفاده شد. محصول pcr با طول مورد نظرbp 1662 درون وکتورهای بیانی pet 28a(+) و pet 22b(+) کلون گردید. جهت تایید کلونینگ٬ پلاسمیدهای نوترکیب بدرون سلولهای مستعد e.coli dh5α ترانسفورم شدند وکلونیهای بدست آمده با استفاده از pcr مستقیم غربالگری شدند. سپس پلاسمیدهای نوترکیب بروش لیز قلیایی استخراج شدندیافته ها: هضم آنزیمی پلاسمیدهای نوترکیب با استفاده از آنزیمهای محدود الاثر nde i وhindiii انجام گرفت که قطعه dna بطول bp 1662 جداسازی شد. پلاسمید نوترکیب pet 28af توسط شرکت mwg آلمان تعیین توالی شد. مقایسه این توالی با توالی ژن f ویروس سرخک از بانک ژن (سوش واکسینال ادمونستون (aik c) با accession number : af266286) انجام گرفت و همولوژی بالایی برای این ژن مشاهده گردید. نتیجه گیری: نتایج این تحقیق نشان داد ژن f بسیار حفاظت شده و پایدار است. این پایداری باعث اهمیت بررسی این ژن در تهیه واکسن نوترکیب شده است.