تشخیص نوروتوکسین کلستریدیوم بوتولینوم تیپ b به روش ساندویچ الایزا

زمینه و هدف: سموم بوتولینوم (bonts) جزء کشنده‌ترین ترکیباتی هستند که تاکنون شناخته‌شده‌ و عامل بیماری بوتولیسم می‌باشند. در حال حاضر، تشخیصbont در غذا به استفاده از سنجش زیستی روی موش آزمایشگاهی است که یک روش بسیار حساس (محدوده تشخیص pg ml-1 7 تا 20) اما زمان‌بر می‌باشد. این روش سریع، اختصاصی و می تواند حساسیتی معادل آزمایش روی موش آزمایشگاهی دارد. هدف از این تحقیق استفاده از روش ساندویچ الایزا جهت شناساییbont/b بود. مواد و روش‌ها: پروتئین نوترکیب 370 اسید آمینه‌ای از انتهای کربوکسیل بخش اتصال‌دهنده سم bont/b با وزن مولکولی 45 کیلودالتون به عنوان آنتی‌ژن بیان و به روش کروماتوگرافی تمایلی ni-nta خالص‌سازی شد. آنتی‌بادی igg از سرم موشی و خرگوشی با روش کروماتوگرافی تمایلی رزین پروتئین g جداسازی و به روش sds-page و آزمون الایزا ، تائیدشد. حساسیت و اختصاصیت روش طراحی‌شده جهت تشخیص آنتی‌ژن نوترکیب bont/b-hcc و توکسوئید بوتولینوم تایپ b ارزیابی شد. نتایج: غلظت آنتیبادی موشی و خرگوشی تخلیص شده به ترتیب 3 و 4/5 میلی‌گرم از هر میلی‌لیتر سرم بود. حداقل غلظت پروتئین قابل شناسایی به روش الایزا غیر مستقیم با آنتی بادی تخلیص شده موشی و خرگوشی 475 و 118 پیکوگرم تعیین شد. با بهینه سازی روش ساندیچ الایزا حداقل30 نانوگرم از آنتی‌ژن نوترکیبbont/b-hcc و 146 پیکوگرم ازbont/b با اختصاصیت بالا شناسایی شد. نتیجه‌گیری: روش ساندویچ الایزای طراحی شده می تواند برای شناسایی دقیق و حساس سم کلستردیوم بوتولینوم تیپ b مورد استفاده قرار گیرد. لازم است در آینده کارآیی این روش برای تشخیص سم بوتولینوم در نمونه های محیطی و غذایی ارزیابی گردد.

detection of clostridium botulinum toxin type b by sandwich elisa method

background and aim: botulinum neurotoxins (bonts) are among the deadliest compounds known to cause botulism. currently, the detection of bonts in food using bioassays on laboratory mice is a very sensitivemethod with a detection range of 7 to 20 pg.ml-1. however, bioassay formice is time-consuming. the sandwich elisa diagnostic method is knownfor being fast, highly specific, and equally sensitive as bioassays using micefor detecting food toxicity. the aim of this study was to use a modifiedsandwich elisa method to detect bont/b toxin.materials and methods: recombinant protein of 370 amino acid from thecarboxyl terminus of the binding domain of bont/b toxin with a molecularweight of 45-kda as antigen was expressed and purified by ni-nta affinitychromatography. igg antibodies were isolated from mouse and rabbit sera byaffinity chromatography using protein g. the sensitivity and specificity ofthe method designed to detect recombinant bont/b-hcc antigen andbotulinum toxin type b were evaluated.results: the purified rat and rabbit antibody concentrations were 3 and 4.5mg.ml-1 serum, respectively. the minimum concentrations of detectableprotein were determined by indirect elisa with purified mouse and rabbit antibodies at 475 and 118 pg.ml-1. by optimizing the sandwich elisa method, we were able to detect at least at least 30 ng.ml-1 of recombinantbont/b-hcc antigen and 146 pg.ml-1 of bont/b toxoid.conclusion: sandwich elisa method can be used for accurate and sensitive identification of clostridium botulinum toxin type b. further studies are needed to evaluate the effectiveness of this method in detecting botulinum toxin in environmental and food samples.