کلون سازی فاکتور رشد اکتیوین a انسانی و بررسی تاثیر بیان همزمان چپرونهای سیتوپلاسمی با آن

 اکتیوین a یکی از اعضای خانواده‌ی فاکتور رشد تغییردهنده‌ی بتا (tgf-β) است که نقش مهمی در فرآیندهای فیزیولوژیکی متعدد همانند تمایز سلولی، ترمیم بافتی، رگ زایی، تمایز سلول های بنیادی، چسبندگی سلولی و آپوپتوز دارد. لذا با توجه به کاربردهای بالینی متعدد این پروتئین، تولید نوترکیب آن سودمند می‌باشد.از آنجاییکه اشرشیاکلی یکی از محبوب ترین میزبان ها برای تولید پروتئین‌های نوترکیب است، در این تحقیق از بیان سیتوپلاسمی در این سویه به منظور تولید مقادیر بالایی از اکتیوین a استفاده گردید. بدین منظورابتدا cdna ناحیه‌ی بالغ ژن اکتیوین a  تکثیر و در وکتور (+)pet28a کلون گردید. وکتور حاصل به سویه‎های (de3)bl21،  plyss(de3)bl21 و  rosetta gami (de3)bl21 انتقال داده شد. پس از القای پروموتر با استفاده از iptg و بیان پروتئین، تولید  اکتیوین a  به وسیله‌ی روش های sds-page و وسترن بلات تایید شد. نتایج نشان داد که بیان اکتیوین a در سیتوپلاسم هر سه سویه یک رویکرد موثر برای دست‌یابی به میزان بالایی از پروتئین نوترکیب است اما در این بین، سویه (de3)bl21 مقدار بیشتری پروتئین تولید کرده است. در مرحله ی بعد به منظور دست یابی به شکل محلول اکتیوین a از بیان همزمان چپرون‌های سیتوپلاسمی tf، groel/es و dnak/j  با وکتور (+)pet28a که حامل اکتیوینa بود استفاده شد. نتایج sds-page و وسترن بلات نشان داد که بیان همزمان اکتیوین a با استفاده از پلاسمید چپرونی pgro7 که دارای چپرون های groel و groes می‌باشد، در سویه‌ی(de3)bl21 یک رویکرد موثر برای تولید پروتئین اکتیوین a محلول است.

cloning of human growth factor activin a and the effects of cytoplasmic chaperons co-expression with it

 activin a, a member of the transforming growth factor-β (tgf-β) superfamily, plays a central role in numerous physiological processes such as cell differentiation, tissue repair, angiogenesis, differentiation of stem cells, cell adhesion and apoptosis. because of its various clinical usages, recombinant production of it is beneficial. since e. coli is one of the most popular hosts for recombinant protein production, in this study, cytoplasmic expression in this strain was used to produce high levels of activin a. so, the cdna of the activin a mature region was amplified and then cloned in pet28a(+) vector. the resulting vector was transformed to bl21(de3), bl21(de3)plyss, and bl21(de3)rosetta-gami strains. after induction the promoter by using iptg, activin a production was confirmed by sds-page and western blotting assays. the results showed that the expression of activin a in the cytoplasm of all three strains was an efficient approach to obtain high levels of recombinant protein, but bl21(de3) strain produced more protein. at the next step in order to achieve soluble form of activin a, co-expression of cytoplasmic chaperones tf, groel/es, and dnak with pet28a (+) vector was used. the sds-page and western blotting results showed that co-expression of activin a with cytoplasmic plasmid pgro7 containing groel and groes chaperones, in bl21(de3) strain is an efficient approach for producing of soluble activin a.