سنجش بنسرآزید به روش مهار فعالیت بیولمینسانسی اکورین

اهداف: بدلیل سهولت استفاده، غیرسمی بودن و قابلیت بالای فتوپروتئین اکورین در سیستم های ردیابی، محققین توجه خاصی به استفاده از این پروتئین بیولومینسانس داشته اند. هدف مطالعه حاضر طراحی روشی برای سنجش دقیق و آسان داروهای مهم در پایش درمانی از طریق روش مبتنی بر مهار فعالیت بیولومینسانسی اکورین است.مواد و روش ها: در پژوه اهداف: به‌دلیل سهولت استفاده، غیرسمی‌بودن و قابلیت بالای فتوپروتئین اکورین در سیستم‌های ردیابی، محققین توجه خاصی به استفاده از این پروتئین بیولومینسانس داشته‌اند. هدف مطالعه حاضر طراحی روشی برای سنجش دقیق و آسان داروهای مهم در پایش درمانی از طریق روش مبتنی بر مهار فعالیت بیولومینسانسی اکورین است.مواد و روش‌ها: در پژوهش تجربی حاضر تعدادی از داروهای مهم در پایش دارویی و دارای شباهت ساختاری با کلنترازین، انتخاب و میانکنش آنها با اکورین بررسی و شرایط سنجش واکنش بیولومینسانسی به‌منظور دستیابی به کمترین حد تشخیص بهینه‌سازی شد.یافته‌ها: از میان داروهای بررسی‌شده، تنها بنسرآزید منجر به مهار فعالیت بیولمینسانسی اکورین شد که این اثر مهاری رفتار وابسته به غلظت داشت. بهترین نمودار دوز پاسخ به دست آمد و ic50 0/26 میکرومولار محاسبه شد. دامنه خطی برای بنسرآزید 100 تا 1500نانومولار و حد تشخیص و حد کمی‌سازی روش به‌ترتیب 79 و 260نانومولار به دست آمد. همچنین امکان استفاده از این روش برای سنجش آنالیت در نمونه سرم بررسی شد و نتایج میزان بازیابی 97% را نشان داد. به‌منظور مشخص‌شدن مکانیزم مهار، نمودار دوز پاسخ بنسرآزید در حضور غلظت‌های مختلف کلنترازین رسم شد که نشان داد ic50 تغییر می‌یابد.نتیجه‌گیری: روش طراحی‌شده می‌تواند برای سنجش بنسرآزید استفاده شود و قابلیت استفاده در نمونه سرم را دارد. همچنین نتایج نشان می‌دهد بنسرآزید با مهار رقابتی فعالیت بیولومینسانسی اکورین را مهار می‌کند.

Determination of Benserazide Based on Bioluminescence Inhibition of Aequorin

Aims: Aequorin as a bioluminescence protein due to ease of use, nontoxic, and high capability of detecting has long been the interest of researchers. The aim of this study was to design a method for accurate and simple detection of important therapeutic agents using a bioluminescence inhibition based assay by using aequorin.Materials Methods: In this study, important drugs in therapeutic monitoring with structural similarity to Coelenterazine, were selected and their interaction with aequorin was investigated. Further, the conditions of the bioluminescence assay were optimized to achieve the lowest detection limit.Findings: Among the drugs whose effects have been tested on aequorin, the only benserazide resulted in inhibition of the bioluminescence activity. This analyte can significantly reduce the bioluminescence of aequorin in a concentrationdependent manner. The best doseresponse curve was obtained and IC50 of 0.26 micro;M was calculated. The linear calibration curve was obtained in a range of about 100 to 1500nM with LOD and LOQ of 79 and 260nM, respectively. Furthermore, we demonstrated the application of the approach in human serum samples with a recovery of 97%. GuddemSchild graph was plotted to determine the mechanism of inhibition which indicated that the IC50 of benserazide changed in the presence of different concentrations of Coelenterazine.Conclusion: The proposed method can be used for measuring benserazide which can easily be applicable for real samples. Also, the results show that benserazide inhibits the bioluminescence activity of aequorin by competitive inhibition.