تولید رده نوترکیب ‌hek293t‌ با بیش- ‌بیانی پایدار ‌mir-1‎‌ به‌عنوان مدل زیستی ‌برای مطالعات قلبی

اهداف: القای مصنوعی بیش بیان mirna راهکار مناسبی برای القای موثرتر تمایز سلولی است. نقش موثر mir1 در تکوین و تمایز سلول‌های قلبی گزارش شده است. لنتی‌ویروس یک ناقل کارآمد برای تهیه رده‌های سلولی پایدار است. هدف پژوهش حاضر تولید رده سلولی با بیش بیان پایدار mir1 برای ایجاد یک مدل زیستی برای مطالعات قلبی بود.مواد و روش‌ها: در پژوهش تجربی حاضر، سلول‌های hek 293t در محیط کشت dmem به‌همراه سرم جنین گاوی (fbs) 10% و ال گلوتامین 2میلی‌مولار و پنی‌سیلین استرپتومایسین 1x در محیط انکوباتور کشت داده شدند. پس از کلون‌کردن ژن mir1، کلون‌های نوترکیب انتخاب شدند و حضور قطعه ژنی در وکتور نوترکیب با توالی‌یابی تایید شد. وکتور حامل mir1 به‌همراه وکتورهای کمکی در سلولhek293t به‌صورت ویروس نوترکیب بسته‌بندی شد. تراآلایی سلول‌های hek293t با ویروس نوترکیب برای تولید رده پایدار انجام شد. سپس کارآیی تراآلایی و رقت موثر ویروس با نشانگر gfp سنجش شد. تغییرات بیان mir1 با روش qpcr بررسی شد. تحلیل داده‌ها از طریق بررسی مقایسه‌ای چرخه آستانه و روش pfaffl انجام گرفت.یافته‌ها: بیشترین میزان بیان gfp مربوط به سلول‌های آلوده‌شده با رقت 150میکرومولار بود. نشانگر فلورسنت gfp موجب تسهیل فرآیند بهینه‌سازی و تخلیص سلول‌های نوترکیب شد. در ارزیابی qpcr، بیان mir1 در سلول‌های تراآلایی شده در مقایسه با سلول‌های گروه کنترل افزایش قابل ملاحظه‌ای داشت.نتیجه‌گیری: رده سلولی پایدار نوترکیب hek293t بیش بیان‌کننده mir1 در لنتی‌ویروس، به‌عنوان مدل زیستی مناسب برای بررسی فرآیندهای تکامل و تکوین قلب است.