|
|
|
|
کلونینگ ژن tpel کلستریدیوم پرفرینجنز در باکتری اشریشیا کلی
|
|
|
|
|
|
|
|
نویسنده
|
مامندی هیمن ,گلستانی‌ایمانی بهرام ,پیله‌چیان‌لنگرودی رضا
|
|
منبع
|
زيست فناوري - 1397 - دوره : 10 - شماره : 1 - صفحه:103 -107
|
|
چکیده
|
توکسین tpel کلستریدیوم پرفرینجنز با فعالیت سیتوتوکسیتی در تیپ های a، b و c در سال های اخیر شناسایی شده است. ﺑﺎﻛﺘﺮی کلستریدیوم پرفرینجنز ﺣﺪاﻗﻞ 15 ﻧﻮع ﺗﻮﻛﺴﻴﻦ ﻣﺨﺘﻠﻒ ﺗﻮﻟﻴﺪ میﻛﻨﺪ ﻛﻪ در ﺑﻴﻤﺎری زایی آن ﻧﻘﺶ دارﻧﺪ. ﺑﺮاﺳﺎس ﺗﻮﻟﻴﺪ ﭼﻬﺎر ﺗﻮﻛﺴﻴﻦ ﻣﻬﻢ و اصلی آﻟﻔﺎ، ﺑﺘﺎ، اﭘﺴﻴﻠﻮن و ﻳﻮﺗﺎ در ﭘﻨﺞ ﮔﺮوه a، b، c، d و e قرار داده ﺷﺪه اﺳﺖ. در این تحقیق از کلستریدیوم پرفرینجنز تیپ b استفاده شد. توکسین tpel موجب ایجاد بیماری های روده ای به ویژه عفونت های روده ای در انسان و بیماری آنتریت نکروتیک طیور می شود. در این مطالعه dna ژنومی کامل به روش فنل کلروفرم استخراج و از روش واکنش زنجیره ای پلیمراز (pcr) برای جداسازی ژن tpel به وسیله یک جفت پرایمر اختصاصی از dna ژنومی کامل باکتری استفاده شد. محصول pcr پس از اتصال به وکتور ptz57rl/t به روش taکلونینگ در باکتری اشریشیا کلی (e. coli) سویه top10 مستعد کلون شد و سپس روش pcr کلونی برای غربالگری کلونی های باکتری ترانسفورم شده با پلاسمید نوترکیب به کار رفت. وجود قطعه مورد نظر روی ژل آگارز 1٪ نشان داد که ژن tpel در اشریشیا کلی سویه top10 کلون شده است.
|
|
کلیدواژه
|
ptz57rl/t vector، کلستریدیوم پرفرینجنز، توکسین tpel، ta-کلونینگ، وکتور ptz57rl/t
|
|
آدرس
|
دانشگاه آزاد اسلامی واحد ارومیه, دانشکده علوم پایه, گروه زیست‌شناسی, ایران, دانشگاه آزاد اسلامی واحد ارومیه, دانشکده علوم پایه, گروه زیست‌شناسی, ایران, سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی, موسسه تحقیقات واکسن و سرم‌سازی رازی, ایران
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Cloning of Tpel Gene of Clostridium perfringens in E. coli
|
|
|
|
|
Authors
|
Mamandi H. ,Golestani Eimani B. ,Pilehchian Langroudi R.
|
|
Abstract
|
Clostridium perfrinjens is an anaerobics, Grampositive, rodshaped and heat resistant bacterium of genus clostridium. C. perfringens is a sporeforming bacterium and widely occurring pathogen. The organism is grouped into 5 types (A, B, C, D, and E) on the basis of the production of 4 major toxins alpha, beta, epsilon, and iota toxins. Tpel Clostridium perfringens (C. perfringens) toxin have identified with A, B, and C types by cytotoxin activity in recent years. In this study C. perfringens type B had been used. Tpel caused to intestinal disease especially intestinal infections in human and necrotic enteritis in birds. In this study, perfect genomic DNA extracted by phenolchloroform and Polymerase Chain Reaction (PCR) method used to isolation Tpel gene by a couple exclusive primer of perfect bacterium genomic DNA. PCR product after joining to pTZ57RL/T vector by TA cloning method in E. coli strain TOP10 susceptible became cloned and then colony PCR method used to screening transforming bacterium colonies with recombinant plasmid. Presence of fragment close to 2469bp on 1% agarose gel indicated that Tpel gene in E. coli strain TOP10 have be cloned.
|
|
Keywords
|
C. perfringens ,Tpel Toxin ,TA Cloning
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|