بیان، خالص‌سازی و بررسی ایمنی‌زایی پروتئین مصنوعی فیوژن (F) ویروس نیوکاسل در مدل حیوانی

ویروس بیماری نیوکاسل (ndv) عامل عفونی طیف وسیعی از پرندگان به ویژه جوجه ها است که همواره یک خطر جدی برای صنعت مرغداری است. این ویروس جزء خانواده پارامیکسوویریده بوده و بر سطح غشای ویروس گلیکوپروتئین های فیوژن (f) و هماگلوتینین نورآمینیداز (hn) ساختارهای زائده مانندی را تشکیل می دهد. از آنجا که در حالت های حاد بیماری، زمان مرگ پس از ابتلا تنها حدود 62 روز است بنابراین ایجاد حفاظت و حضور آنتی بادی های محافطت کننده در بدن پرنده به منظور پیشگیری از بیماری بسیار حائز اهمیت است. مشخص شده است که آنتی بادی های تولیدشده علیه گلیکوپروتئین های سطحی هماگلوتینین و پروتئین فیوژن، قادر به خنثی سازی ndv و جلوگیری از گسترش و فعالیت آن می شوند. در این پژوهش تجربی، اپی توپ های ایمونوژن پروتئین f ویروس نیوکاسل به طور مصنوعی ساخته شده و در میزبان پروکاریوتی اشریشیا کلی با استفاده از ناقل مناسب (pet32a) بیان و به منظور بررسی ایمنی زایی در حیوان مدل (موش) از طریق تزریق، استفاده شدند. ایجاد ایمنی و افزایش تیتر آنتی بادی های ویژه پروتئین f در سرم موش های ایمن شده اندازه گیری شد. نتایج نشان داد که ایمنی زایی موش ها با این پروتئین نوترکیب منجر به افزایش تیتر آنتی بادی از کلاس igg شده و آنتی بادی های سرمی تا رقت 204800/1 نیز قادر به شناسایی پروتئین نوترکیب بودند. علاوه بر این تشخیص پروتئین نوترکیب f توسط سرم موش ایمن شده با واکسن تجاری و همچنین شناسایی ویروس سویه واکسن توسط سرم حیوان ایمن شده با پروتئین f نوترکیب توسط روش الایزا نشان داد که این پروتئین نوترکیب ضمن توانایی تحریک سیستم ایمنی حیوان مدل علیه ویروس های عفونی محیطی، قادر است اپی توپ های مشابه با سویه واکسن را نیز ارایه دهد.

Expression, Purification and Immunogenicity Evaluation of Recombinant Fusion Protein (F) from Newcastle Virus in Animal Model

Newcastle disease virus (NDV) is an infectious agent of a large variety of birds, including chickens, which poses a real threat to the poultry industry. This virus is a member of the avian Paramyxoviridae. NDV is enveloped with membraneembedded spikes consisting of glycosylated hemagglutinin (HN) and fusion (F) proteins. The mean death time after vNDV infection is 26 days, hence, the presence of preexisting antibodies prior to infection appears to be the most critical protection from this disease. Antibodies produced against the HN and F transmembrane surface glycoproteins are able to neutralize NDV upon subsequent infection and inhibition of viral fusion with the host cell membrane, respectively. In this experimental study, the immunogenic epitopes of the F protein of NDV were designed artificially and were expressed in the heterologous system (Escherichia coli), using the appropriate vector (pET32a). In order to evaluate the immunogenicity of the recombinant f fragment, the protein was injected into the animal model. Immune response and the rise of specific antibodies titers were determined in immune sera. The results showed that immunization of mice with this recombinant protein could elicit significant serum IgG antibody up to 1/204800 titer. We show that the recombinant F protein was recognized by the mice sera immunized with the commercial vaccine. Moreover, the reactivity of vaccine strain virus with sera from F protein immunized mice suggested that the F protein is able to present similar epitopes with viral vaccine strain and hopefully could stimulate the immune system of the animal against the infectious viruses.