شناسایی مولکولی و بهینه‌سازی تولید آنزیم پروتئاز قلیایی خارج سلولی باکتری باسیلوس پسودوفیرموس msb22 با استفاده از روش‌شناسی سطح پاسخ

اهداف: پروتئازهای قلیایی یکی از مهم ترین گروه از آنزیم های صنعتی هستند و کاربردهای فراوانی دارند. هدف مطالعه حاضر یافتن پارامترهای فیزیکوشیمیایی موثر بر تولید آنزیم پروتئاز قلیایی تولیدشده توسط باکتری باسیلوس پسودوفیرموس msb22 به وسیله روش تک عاملی (ofat) و سپس بهینه سازی تولید این آنزیم با روش سطح پاسخ در قالب طرح مرکب مرکزی چرخش پذیر بود.مواد و روش ها: در مطالعه تجربی حاضر جداسازی میکروارگانیزم تولیدکننده پروتئاز قلیایی از نمونه های پساب کارخانه های سوسیس و کالباس اصفهان انجام شد. خصوصیات موفولوژیکی و بیوشیمیایی سویه طبق کتاب برگی و به وسیله تکثیر توالی ژن 16s rrna صورت پذیرفت. تشخیص ژن متالوپروتئاز و سرین پروتئاز قلیایی با واکنش واکنش زنجیره ای پلی مراز (pcr) و سنجش فعالیت آنزیم با معرف فولین انجام شد. غربالگری متغیرهای موثر در تولید آنزیم با روش تک عاملی و بهینه سازی تولید با روش سطح پاسخ و بررسی آماری صورت گرفت. نرم افزار mega 6 برای آنالیزهای فیلوژنتیکی به کار رفت. به منظور تحلیل داده ها نرم افزار design expert 7 و آزمون تحلیل واریانس یک طرفه به کار رفتند.یافته ها: حداکثر تولید پروتئاز که به ترتیب 85/1برابر و 3/45 برابر بیشتر از مقدار تولیدشده حاصل بهینه سازی روش تک عاملی و شرایط غیربهینه بود، با استفاده از 1% قند زایلوز، 3% عصاره گوشت، 4% مایه تلقیح باکتریایی، در ph برابر 10 و دمای 30درجه سانتی گراد به دست آمد. مدل درجه دوم به دلیل بالابودن مقدار ضریب تشخیص پیش بینی، توانایی زیادی در پیش بینی داده های جدید داشت.نتیجه گیری: روش تک عاملی و سطح پاسخ به ترتیب در غربالگری متغیرهای موثر و بهینه سازی تولید آنزیم مفید هستند و ژن های sub i و sub ii (ژن های سرین پروتئازهای قلیایی) در باسیلوس پسودوفیرموس msb22 وجود دارند.