کلونینگ اپران پلی‌هیدروکسی بوتیرات و ژن E باکتریوفاژ در پلاسمیدهای جداگانه و بررسی عملکرد ژن E در تسهیل تولید پلی‌هیدروکسی بوتیرات در اشریشیا کولی

مقدمه: بیوپلاستیک پلی‌هیدروکسی بوتیرات کاربرد گسترده در صنایع مختلف و ساخت تجهیزات پزشکی دارد. هزینه‌های استخراج و تخلیص پلی‌هیدروکسی بوتیرات در اشریشیا کولی، بخش اعظم هزینه‌های تولید را به خود اختصاص داده است. ژن e باکتریوفاژ ?x174 با ایجاد تونل غشایی برای لیز باکتری میزبان استفاده می‌شود. هدف از انجام این مطالعه، بررسی عملکرد ژن e در ایجاد تونل غشایی و رهاسازی پلی هیدروکسی بوتیرات تولیدشده در اشریشیا کولی می‌باشد. مواد و روش‌ها: در این مطالعه، اپران پلی هیدروکسی بوتیرات بعد تکثیر اولیه با واکنش زنجیره پلی‌مراز توسط پلاسمید puc18 کلون و تحت کنترل پروموتور اپران بیان شد. ژن e نیز پس از تکثیر با واکنش زنجیره پلی‌مراز توسط پلاسمید pmr103 کلون و تحت کنترل پروموتور t7 بیان گردید. برای بررسی تشکیل تونل غشایی در باکتری میزبان از میکروسکوپ الکترونی استفاده شد. ارزیابی پلی‌هیدروکسی بوتیرات تولیدی با کروماتوگرافی گازی و رنگ‌آمیزی سودان سیاه انجام شد. یافته‌ها: با فعال شدن ژن e و لیز باکتری، جذب نوری نمونه کاهش یافت. در بررسی بقایای باکتریایی به‌دست‌آمده از محیط کشت باکتری نوترکیب با میکروسکوپ الکترونی، منافذ غشایی در باکتری‌های لیز شده دیده شد. نتایج رنگ‌آمیزی سودان سیاه و کروماتوگرافی گازی نشان داد که گرانول‌های پلی‌هیدروکسی بوتیرات در اثر ایجاد تونل‌های غشایی در محیط کشت آزاد شده است.نتیجه‌گیری: ژن لیز e می‌تواند برای کاهش هزینه و تسهیل استحصال پلی‌هیدروکسی بوتیرات در باکتری دراشریشیا کولی به‌کار رود که می‌تواند در ساخت تجهیزات یکبار مصرف پزشکی و اتاق عمل مورد استفاده قرار گیرد.