بکارگیری و مقایسه روش‌های پی‌سی‌آر معمولی، آشیانه‌ای و چندگانه در تشخیص منشا حیوانی یا انسانی‌ بودن نمونه‌های خون

اهداف: لکه‌های مشکوک به خون، جزو رایج‌ترین مدارکی است که در صحنه جرم وجود دارد، از این‌رو تعیین منشاء حیوانی یا انسانی بودن این نمونه‌ها از اساسی‌ترین آنالیزها در آزمایشگاه‌های جنایی محسوب می‌شود. مطالعه حاضر با هدف بکارگیری و مقایسه روش‌های pcr معمولی، آشیانه‌ای و چندگانه در تشخیص منشا حیوانی یا انسانی بودن نمونه‌های خون انجام شد.مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی به منظور تشخیص منشا حیوانی یا انسانی بودن نمونه‌های خونی و بکارگیری آن‌ها در بررسی‌های جنایی، روش‌های مختلف pcr آشیانه‌ای، چندگانه و معمولی مورد ارزیابی قرار گرفت. روش‌های pcr بر اساس تکثیر قطعاتی از سیتوکروم b و قطعه 16s ریبوزومی میتوکندری طراحی شدند.یافته‌ها: حضور تک باند 157 و 170 جفت بازی به ترتیب در pcr آشیانه‌ای و معمولی و دو باند 157 و 359 در واکنش چندگانه نشان‌دهنده نمونه‌های خونی انسانی بود. حضور تک باند 359 در واکنش چندگانه و باندهای چندتایی در pcr معمولی نشان‌دهنده نمونه‌های خونی با منشا غیرانسانی بود.نتیجه‌گیری: یافته‌های مطالعه حاضر نشان می‌دهد که روش pcr چندگانه که بر پایه شناسایی ژن 16s ریبوزومی میتوکندری طراحی شده، علاوه بر مقرون به صرفه بودن از لحاظ زمان و هزینه، دارای دقت بالایی در تشخیص منشا حیوانی یا انسانی بودن نمونه‌ها است و می‌تواند برای اهداف جنایی بسیار مفید باشد. زیرا قطعه 16s یک قطعه کوچک ویژه انسانی می‌باشد که به راحتی در نمونه‌هایی که dna آن‌ها تخریب شده است با این روش قابل تکثیر است.

Application and Comparison of Conventional, Nested, and Multiplex PCR for Discriminating between Human and Animal Origin for Blood Stains

Aims: Suspected blood stains are among common forms of trace evidence found at crime scenes. Therefore, discriminating between human and animal origin for blood stains is one of the fundamental analyses in forensic laboratories. Currently, tests for determining the origin of bloodstains, such as serology and presumptive tests, are timeconsuming and destructive to the sample. However, different polymerase chain reaction (PCR) methods can be used as highly sensitive and specific techniques for determining a bloodstain rsquo;s origin.Materials Methods: This experimental study was performed to evaluate conventional, nested, and multiplex PCR for discriminating between human and animal bloodstains, and using them in criminal investigations. These methods were designed based on the PCR amplification of cytochrome b and 16S ribosomal mitochondrial DNA fragment.Findings: The presence of a single band 157 and 170 base pair (bp) in nested and conventional PCR, respectively, as well as two bands 157 and 359 in multiplex PCR, indicates a human blood sample. However, the presence of a single band 359 bp in multiplex PCR and multiple bands in conventional PCR points to the sample rsquo;s nonhuman origin.Conclusion: This study demonstrated that a multiplex PCR assay designed based on the identification of mitochondrial ribosomal 16S gene has high accuracy in differentiating between human and nonhuman bloodstains, in addition to being affordable in terms of time and cost. This assay can be useful for forensic purposes because the 16S ribosomal mitochondrial fragment is a small humanspecific fragment that is easily amplifiable, even in degraded DNA samples from biological materials.