استخراج مستقیم و خالص سازی dna کل از جامعه میکروبی خاک و ردیابی مولکولی فرم‌های اختصاصی بیمارگر خاکزاد fusarium oxysporum عامل پژمردگی آوندی گوجه فرنگی

دستیابی به اطلاعات مولکولی و ژنتیکی توانسته است بسیاری از چالش‌های علوم زیستی را در جنبه‌های مختلف حل کند. روش‌های کاربردی بسیاری جهت استخراج dna از بافت‌های جانوری و گیاهی و سایر موجودات زنده شناسایی و معرفی شده است.، در بسیاری مطالعات ژنتیکی در جوامع میکروبی، اغلب نیاز به استخراج مستقیم dna از خاک است. در این تحقیق پس از مطالعه دقیق روش‌های مختلف پیشنهادی، سه روش (شیمیایی آنزیمی)، (شیمیایی مکانیکی) و (شیمیایی آنزیمی مکانیکی)، جهت استخراج dna ازجامعه میکروبی خاک، جداگانه طرح و مورد مطالعه و بررسی قرار گرفت تا مناسب‌ترین روش، شناسایی و معرفی شود. مقایسه بین روش‌های مختلف در شرایط برابر و 5 تکرار برای هر روش، در محصول dna اختلاف مشخصی را از میانگین غلظت32/2 تا 1/6 نانوگرم بر میکرولیتر dna رقیق شده، نشان داد و همچنین بر اساس اطلاعات بدست آمده از دستگاه نانودراپ و الکتروفورز و بررسی نسبت dna به پروتئین در محصول استخراج dna، روش (شیمیایی آنزیمیمکانیکی) با کارایی بهتر در غلظت بیشتر، حذف هیومیک‌اسید، پروتئین و سایر آلودگی‌ها به سایر روش‌ها برتری داشت. در این تحقیق همچنین ردیابی مولکولی بیمارگر‌ها به عنوان یکی از کاربردهای مهم استخراج مطرح و فرم اختصاصی fusarium oxysporum f. sp lycopersici و fusarium oxysporum f. sp. radicis lycopersici عامل پژمردگی آوندی در گوجهفرنگی از جامعه میکروبی خاک به وسیله تکنیک‌های مولکولی با آغازگر اختصاصی uni شناسایی شد. نتایج ردیابی مولکولی، حضور فرم‌های اختصاصی این بیمارگر را در نمونه خاک s1 با 5 تکرار تائید می‌نماید.

Direct extraction and purification of soil microbial total DNA and molecular detection of soilborne pathogen Fusarium oxysporum causal agent of tomato vascular wilt

Molecular analysis is often required in many genome extracted from various tissues. In much molecular analysis of genetic studies of microbial communities, often require direct extraction of DNA from soil. In this study, after careful study of the various methods proposed three methods (chemical enzyme), (chemimechanical) and (chemical mechanical enzymatic), in order to extract DNA from soil, a separate project was studied to most identify different methods of extraction. The comparison between the same conditions, a significant difference in the DNA product of the average concentration of 2/32 to 6/1 ng per µl DNA was diluted and also on the basis of information obtained from Nanodrop and electrophoresis device and review of the DNA extracted protein product DNA, methods (chemical, mechanical, enzymatic) better performance at higher concentrations, remove humic acid proteins and other contaminants was superior to other methods. The molecular detection of pathogens that extraction is important applications; the aim of this study is molecular detection of pathogen Fusarium oxysporum f. sp lycopersici and Fusarium oxysporum f. sp. radicis lycopersici of soil microbial community by molecular techniques to identify the special primer evaluated. Molecular detection results showed that there is tomato Fusarium infection in soil samples S1.