استفاده ازتکنولوژی پروتیین نوترکیب برای تهیه آنتی‌بادی اختصاصی علیه ناقل بیماری رایزومونیا در چغندرقند

بیماری ریشه‌گنایی (رایزومانیا) از مهمترین بیماری‌های ویروسی چغندرقند می‌باشد. عـامـل این بیماری ویروس رگبرگ زرد نکروتیک چغندرقند می-باشد. قارچ polymyxa betae به عنوان تنها ناقل طبیعی این ویروس شناخته شده است. با توجه به ماهیت پارازیت اجباری ناقل و عدم قابلیت کشت در آزمایشگاه، شناسایی گیاهان آلوده معمولا بر اساس مشاهده میکروسکوپی انجام می شود. در این تحقیق به منظور تسهیل در روند شناسایی، آنتی بادی اختصاصی بر علیه این قارچ با استفاده از تکنولوژی پروتیین نوترکیب تولید گردید. پروتیین گلوتاتیون-اس-ترانسفراز (gst) اختصاصی p. betae، به عنوان آنتی‌ژن جهت تولید آنتی‌بادی به منظور شناسایی ناقل در گیاهان آلوده استفاده شد. تولید انبوه پروتیین gst بصورت نوترکیب و در میزبان باکتریایی صورت پذیرفت. ابتدا ناحیه کد‌کننده این پروتیین با استفاده از آغازگرهای اختصاصی و از روی قالب cdna تهیه گردیده از گیاهان آلوده جداسازی گردید. ژن مزبور سپس به صورت متصل به دنباله شش‌تایی هیستیدین در ناقل بیانی باکتریایی همسانه‌سازی گردیده و بیان آن به صورت نوترکیب در باکتری escherichia coli صورت پذیرفت. خالص سازی پروتیین نوترکیب gst در شرایط طبیعی غیر واسرشتی و با استفاده از روش کروماتوگرافی تمایلی بر روی ستون نیکل انجام گردید. کمیت و کیفیت پروتیین نوترکیب حاصله بر روی ژل‌پلی‌اکریلامید بررسی شد. به منظور تولید آنتی‌بادی، پروتیین نوترکیب gst خالص جهت انجام ایمنی زایی در خرگوش مورد مطالعه قرار گرفت و پس از تهیه آنتی بادی با تیتر بالا، خالص سازی آن با استفاده از ستون پروتیین a صورت گرفت. نتایج آزمایشات سرولوژیکی حاکی از قابلیت بالای آنتی بادی های حاصله جهت شناسایی قارچ ناقل در نمونه های گیاهی آلوده می باشد.