جایگیری درون هسته‌ای پروتئین Agrobacterium VirD2در مدل ژنتیکی Saccharomyces cerevisiae

در طبیعت agrobacterium tumefaciens پس از تماس با سلول‌های زخمی گیاهی از طریق سیستم ترشحی نوع iv بخشی از پلاسمید مولد تومور خود، t-dna، و تعدادی پروتئین بیماری-زایی را بدرون سلول گیاه می فرستد. پروتئین بیماری‌زایی vird2 که بصورت کووالان به انتهای ´5 ملکول t-dna می‌چسبد در انتقال و ورود این ملکول بدرون هسته و ژنوم گیاهان میزبان نقش دارد. a.tumefaciens قادر به تراریخت موجودات غیرگیاهی نیز می‌باشد. وجود پروتئین vird2 فعال برای تراریخت اگروباکتریومی سلول‌های گیاهی و غیرگیاهی ضروری است. در این پژوهش با استفاده از پروتئین فلورسنت سبز (ygfp), جایگاه درون سلولی پروتئین vird2 در سلول‌های قارچ مدل ژنتیکی saccharomyces cerevisiae مورد بررسی قرار گرفت. بدین منظور، ابتدا ژن vird2 توسط واکنش زنجیره‌ای پلیمراز تکثیر و در پلاسمید pgbdkc1 کلون شد. سپس ژن مذکور بدرون جایگاه‌های کلونینگ وکتورهای pug34, pug35 و pug36 که حامل ژن ygfp تحت کنترل پروموتر met25 می باشند کلون شد. انتقال ژن به استرین‌های اکسوترف s. cerevisiae بروش شیمیایی استات لیتیوم انجام شد. نتایج مطالعات فلورسنس میکروسکوپی نشان داد که vird2 متصل شده از پایانه‌ی آمینویی‌ش به پایانه‌ی کربوکسیلی پروتئین فلورسنت سبز، بیان شده از پلاسمیدهای pug34 و pug36، درون هسته‌ی سلول میزبان s.cerevisiae جای می-گیرد. این یافته، اهمیت توالی هسته یاب (nls) پایانه‌ی کربوکسیلی پروتئین vird2 در جایگیری درون هسته‌ای این پروتئین در سلول غیرگیاهی مخمر را می‌رساند.