تراریزش گوجه‌فرنگی با استفاده از ناقل نوترکیب حاوی ژن‌های Pr1، کیتیناز و گلوکاناز

گوجه فرنگی یکی از مهم‌ترین گیاهان باغی می‌باشد که به طور وسیعی در سراسر دنیا کشت می-شود. هر ساله بیماری‌های قارچی از جمله فوزاریوم خسارت زیادی به این محصول وارد می‌کنند. در این پژوهش به منظور تقویت سیستم دفاعی گوجه‌فرنگی، ژن‌های pr1، کیتیناز و گلوکاناز را به صورت هم‌زمان به گیاه مذکور انتقال دادیم. به این منظور، ابتدا ژن pr1 از ژنوم گیاه توتون استخراج شد و تحت کنترل پیشبر 35s و پایانبر nos در ناقل نوترکیب pbi121 همسانه‌سازی شد. ژن‌های کیتیناز و گلوکاناز نیز تحت پیشبرهای مستقل 35s و پایانبر nos در ناقل مذکور و در مجاورت ژن pr1 همسانه‌سازی شدند. سپس با استفاده از روش اگروباکتریوم تراریزش ریزنمونه-های گیاه گوجه‌فرنگی توسط ناقل نوترکیب pbi121-prp-1chiglu(-)، حاوی سه ژن pr1، کیتیناز و گلوکاناز، انجام گرفت. به این منظور، ابتدا ریزنمونه‌های برگ لپه‎ای پس از قرارگیری بر روی محیط پیش کشت، به وسیله سویه lba4404 اگروباکتریوم حاوی ناقل مورد نظر تلقیح شدند. ریزنمونه‌های حاصل به محیط هم‌کشتی و پس از آن به محیط کشت باززایی انتقال یافتند. ریزنمونه‌ها هر هفت روز یک بار واکشت شده و پس از گذشت چهار هفته به محیط کشت ریشه-زایی حاوی 200 میلی‎گرم در لیتر سفوتاکسیم و 25 میلی‎گرم در لیتر کانامایسین انتقال یافتند. آنالیزهای مولکولی واکنش زنجیره‎ای پلیمراز و لکه‎گذاری نقطه‎ای نشان دادند که گیاهان تراریخته حداقل یک نسخه از ژن‌های مورد نظر را در ژنوم خود، دریافت نموده‌اند.