توسعه و بهینه سازی تکنیک مقرون به صرفه tetra-primer arms pcr به منظور بررسی جهش g + 6723> a ژن میوستاتین در گوسفند قره گل

میوستاتین که فاکتور رشد و تمایز 8 (gdf8) نیز نامیده می‌شود به‌عنوان یک تنظیم کننده منفی رشد و توسعه عضلات عمل می‌نماید. بنابراین نقش آن در رشد حیوانات و تولید گوشت حائز اهمیت است. مطالعات عملکردی نشان داده است که یک چندشکلی تک نوکلئوتیدی در ناحیه 3’utr این ژن سبب حذف نقش مهاری میوستاتین و در نهایت بروز فنوتیپ ماهیچه مضاعف در گوسفند می‌شود. روش tetra primer arms pcr یک روش آسان، سریع، قابل اعتماد و ارزان برای شناسایی چندشکلی تک نوکلئوتیدی می باشد. مطالعه حاضر با هدف شناسایی جهش تک نوکلئوتیدی ژن میوستاتین (g + 6723g> a) با روش tetra primer arms pcr در 86 راس گوسفند قره‌گل انجام شد. بهینه‌سازی واکنش زنجیره‌ای پلیمراز با استفاده از 3 نمونه شاهد شامل هموزیگوت وحشی، هتروزیگوت و هموزیگوت جهش یافته گوسفند نژاد شاروله صورت گرفت. تمامی نمونه‌های قره گل مورد بررسی دارای آلل g برای چندشکلی تک نوکلئوتیدی ذکر شده بودند و آلل جهش یافته a مشاهده نشد، بنابراین فراوانی آلل جهش یافته (a) و آلل وحشی (g) به‌ترتیب صفر و 100 درصد می باشد. به‌منظور ارزیابی دقت تکنیکtetra primer arms pcr در این جایگاه، تمامی افراد آزمایش شده با روش pcr-rflp نیز تعیین ژنوتیپ شدند. نتایج حاصل، حاکی از تطابق دو روش با یکدیگر می‌باشد و از این رو می‌توان در جهت تعیین ژنوتیپ از روش tetra primer arms pcr به‌عنوان روشی مقرون به صرفه استفاده نمود.

development and optimization of cost-effective tetra-primer arms pcr technique for detection of myostatin gene g + 6723g>a polymorphism in karakul sheep

myostatin, also called growth and differentiation factor 8 (gdf8), acts as a negative regulator of muscle growth and development; therefore, its role in animal growth and meat production is very important. functional studies showed that a single nucleotide polymorphism in the 3’utr region of this gene causes the elimination of its growth inhibitory role and finally the occurrence of double - muscled sheep. the tetra primer arms pcr method is an easy, fast, reliable and cost-effective method for the detection of nucleotide polymorphism. the present study was conducted with the aim of identifying single nucleotide polymorphism of myostatin gene (g+6723g>a) using tetra primer arms pcr technique in 86 karakul sheep. polymerase chain reaction was optimized using 3 control samples including 1 homozygous wild-type, 1 heterozygous and 1 homozygous mutant genotype of sharole breed sheep. all the studied karakul sheep had the g allele, and the mutant type allele (a allele) was not observed, so the frequencies of the mutant type (a) and the wild type (g) alleles were 0 and 100%, respectively. to evaluate the accuracy of tetra primer arms pcr technique in this locus, all tested samples were also genotyped by pcr-rflp method. the results indicated that two methods are the same as therefore using tetra primer arms pcr method been as economical to genotyping