ارزیابی میزان ایمنی زایی آنتی ژن ipad متصل شده به لیگاندهای co1 و stxb به‌صورت نازال بر علیه باکتری e. coli سویه o157:h7 در موش سوری

باکتری شیگلا، شایع‌ترین عامل اسهال بوده و تاکنون واکسن موثری علیه آن یافت نشده‌است. پروتئین ipad و زیر واحدb انتروتوکسین شیگلا (stxb) نقش مهمی در تهاجم، بیماری‌زایی و ایجاد عفونت توسط شیگلا دارد. از طرفی، لیگاند co1 به‌عنوان یکی از سیستم‌های انتقالی آنتی ژن‌ها به سلول‌های m در لایه مخاطی، شناخته شده‌است. برای بررسی و مقایسه میزان ایمنی‌زایی هر یک از پروتئین‌های ipad، ipad-stxb و ipad-co1 از مدل حیوانی موش سوری و روش نازال استفاده شد. توالی کد‌کننده این پروتئین‌ها در ناقل pet28a کلون و به درون باکتری e.coli bl21 (de3) منتقل شد. بیان پروتئین نوترکیب با استفاده از تکنیک لکه‌گذاری وسترن، مورد ارزیابی قرار گرفت. پروتئین نوترکیب با استفاده از ستون کروماتوگرافی جذبی تخلیص و در چهار نوبت متوالی به موش سوری به‌صورت نازال داده شد. از نوبت دوم (یادآور اول) به بعد، یک هفته پس از دادن آنتی ژن، خون‌گیری انجام و سرم مورد آزمایش الایزا قرار گرفت. نتایج نشان داد که میزان تولید آنتی بادیigg علیه پروتئین ipad-stxb بیش‌ترین و پروتئین ipad-co1 بعد از آن قرار داشت. چالش ایمنی‌زایی این پروتئین‌ها با استفاده از سم فعال باکتری e. coli سویه o157:h7 مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج نشان داد که موش‌های ایمن شده توانستند در گام اول پنج برابر ld50 شیگا توکسین e. coli o157:h7 را تحمل نمایند؛ اما با تزریق 10 برابری ld50، پس از 24 ساعت موش‌های ایمن شده با ipad و ipad-co1 و پس از 72 ساعت موش‌های ایمن شده با ipad-stxb از بین رفتند. بر طبق نتایج مشخص شد که پروتئین ipad-stxb در قیاس با فیوژن ipad-co1 قدرت ایمنی‌زایی بیش‌تری در موش سوری نسبت به شیگا توکسین دارد.

immunogenic evaluation of nasal administration of conjugated ipad with co1 and stxb ligands against e.coli o157: h7 in mice

the most common cause of diarrhea is shigella and no vaccine has been found so far. ipad and b subunit of shiga toxin proteins (stxb) play an important role in invasion, infection and pathogenesis caused by shigella. on the other hand, co1 ligand has introduced as one of the antigen delivery systems to m-cells in mucosal layer. in this study, nasal administration of antigen in mice, used to evaluation and comparison of immunogenicity of ipad, ipad-stxb and ipad-co1 proteins. the coding sequences of proteins cloned in pet28a vector and transformed to bacterial strain of e.coli bl21(de3). recombinant protein expression confirmed by using of western bloting technique. the each one of the recombinant protein purified by affinity chromatography column and used for nasal administration in four times consecutively on mice. after the second nasal administration (first booster), a week after each administration, blood samples were collected and elisa performed on serum. the elisa results of serum titration showed that the highest amount of igg has been produced against ipad-stxb protein; and ipad-co1 was in next step. the immunogenicity was evaluated using active toxin e. coli o157:h7. the challenge results showed that immunized mice could endure 5 times the ld50 shiga toxin e. coli o157: h7; but after injection of 10 times the ld50, the immunized mice by ipad, ipad-co1 and ipad-stxb were death after 24, 24 and 72 hours, respectively. according to these results recombinant protein ipad-stxb founded to be more immunogenic than ipad-co1 against shiga toxin in mice.