|
|
|
|
بیان سلولاز cmc3 تحت کنترل راه‌اندازهای متانل اکسیداز و الکل اکسیداز در مخمر pichia pastoris
|
|
|
|
|
|
|
|
نویسنده
|
ممبنی محسن ,ارجمند ساره ,رعنایی‌سیادت امید ,عباسی علیرضا ,علیزاده هوشنگ
|
|
منبع
|
ژنتيك نوين - 1398 - دوره : 14 - شماره : 1 - صفحه:13 -23
|
|
چکیده
|
راه اندازهای کوتاه و قدرتمند از اجزای کلیدی بیان موفق پروتئین نوترکیب در میزبان های مختلف از جمله مخمر pichia pastorisمی باشند. در این مطالعه بیان خارج سلولی آنزیم سلولاز بتااندوگلوکاناز (cmc3) تحت کنترل راه انداز متانول اکسیداز (mox) و الکل اکسیداز 1 (aox1) با تحت خوراک دهی متانول مورد بررسی قرار گرفت. به منظور حذف اثر تعداد کپی، کلون های نوترکیب حاوی یک نسخه جای گیری در ژنوم با استفاده از روش real-time pcr شناسایی و مورد استفاده قرار گرفتند. نتایج حاصل از سنجش فعالیت آنزیم، زایموگرافی و sds-page بیان قدرتمند و قابل مقایسه سلولاز تحت کنترل هر دو راه انداز mox و aox1 در این مخمر را نشان دادند. نتایج بیان قوی cmc3 نشان داد که راه انداز کوتاه mox می تواند با موفقیت برای تولید پروتئین نوترکیب با بیان بالا مورد استفاده قرار گیرد.
|
|
کلیدواژه
|
پروتئین نوترکیب، سلولاز، راه‌انداز، pichia pastoris
|
|
آدرس
|
دانشگاه تهران، پردیس کشاورزی و منابع طبیعی, گروه بیوتکنولوژی کشاورزی و منابع طبیعی, ایران, دانشگاه شهید بهشتی، پردیس عمومی, مرکز تحقیقات پروتئین, ایران, دانشگاه شهید بهشتی، پردیس عمومی, مرکز تحقیقات پروتئین, ایران, دانشگاه تهران، پردیس کشاورزی و منابع طبیعی, گروه بیوتکنولوژی کشاورزی و منابع طبیعی, ایران, دانشگاه تهران، پردیس کشاورزی و منابع طبیعی, گروه بیوتکنولوژی کشاورزی و منابع طبیعی, ایران
|
|
پست الکترونیکی
|
halizade@ut.ac.ir
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
The expression of cellulase CMC3 under control the alcohol oxidase 1 (AOX1) and methanol oxidase (MOX) promoters in the yeast Pichia pastoris
|
|
|
|
|
Authors
|
Mombeni M ,Ranaei Siyadat SO ,Abassi A ,Alizadeh H
|
|
Abstract
|
Small and powerful promoters play a key role in recombinant protein expression in different hosts including Pichia pastoris. In the present study, expression of cellulase beta endoglucanase CMC3 gene was studied under the control of the alcohol oxidase 1 (AOX1) and methanol oxidase (MOX) promoters, with the methanol feeding, in the yeast Pichia pastoris. To avoid the gene dosage effect, colonies harbored single copy of target constructs were screened by RealTime PCR method. The results of enzymatic assay, zymogaphy and SDSPAGE for the culture of single copy harboring transformants showed powerful, comparable expression of CMC3 under the control of both MOX and AOX1 promoters. Highlevel expression of recombinant CMC3 under control of the MOX promoter indicated that this small, new powerful promoter could be considered as a promising tool for recombinant protein production in the yeast Pichia pastoris.
|
|
Keywords
|
cellulose ,Pichia pastoris ,promoter ,recombinant protein ,Pichia pastoris
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|