|
|
|
|
تولید شکل نوترکیب گلوتاردوکسین گیاه برنج در باکتری اشریشیاکلی
|
|
|
|
|
|
|
|
نویسنده
|
شیخ الاسلام اصفهانی احسان ,شاه پیری آذر
|
|
منبع
|
ژنتيك نوين - 1398 - دوره : 14 - شماره : 1 - صفحه:55 -61
|
|
چکیده
|
گلوتاردوکسین ها (grx ها) ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦ ﻫﺎیﯽ ﺑﺎ وزن ﻣﻮﻟﮑﻮﻟﯽ پایین ﻫﺴﺘﻨﺪ ﮐﻪ ﺑﺎ داﺷﺘﻦ یﮏ ﮔﺮوه ﺗﯿﻮل-دی ﺳﻮﻟﻔﯿﺪ در ﺟﺎیﮕﺎه ﻓﻌﺎﻟﺸﺎن در اﺣﯿﺎ ﺑﺮﮔﺸﺖ ﭘﺬیﺮ ﭘﯿﻮﻧﺪﻫﺎی دی ﺳﻮﻟﻔﯿﺪی ﻧﻘﺶ دارﻧﺪ. این پروتئین ها توسط آنزیم گلوتاتیون ردوکتاز توسط مولکول گلوتیون احیا می شوند. سپس این پروتئین خود در احیای باندهای دی سولفیدی پروتئین های دیگر دخالت دارد. ایﺰوﻓﺮم ﻫﺎی ﻣﺨﺘﻠﻔﯽ از grx در ﮔﯿﺎﻫﺎن وﺟﻮد دارد. در ﭘﮋوﻫﺶ ﺣﺎﺿﺮ ﺗﻮاﻟﯽ ژن کد کننده ایﺰوﻓﺮم osgrx9 از ﮔﯿﺎه ﺑﺮﻧﺞ ﭘﻼﺳﻤﯿﺪ ﺑﯿﺎﻧﯽ pet28a، ﻫﻤﺴﺎﻧﻪ ﺳﺎزی و ﺳﭙﺲ ﺑﻪ ﺳﻮیﻪ ی ﻣﻨﺎﺳﺒﯽ از ﺑﺎﮐﺘﺮی اﺷﺮیﺸﯿﺎ ﮐﻠﯽ ﺑﻪ ﻧﺎم (de3) rosetta ﻣﻨﺘﻘﻞ ﺷﺪ. ﺑﺎ ﺗﺤﺮیﮏ ﭘﺮوﻣﻮﺗﺮ t7 ﺑﻪ وﺳﯿﻠﻪی iptg، ﻣﯿﺰان ﻣﻨﺎﺳﺒﯽ از ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦ ﻧﻮﺗﺮﮐﯿﺐ his-osgrx9 در فاز محلول باکتری ﺗﻮﻟﯿﺪ شد و سپس ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از روش ﮐﺮوﻣﺎﺗﻮﮔﺮاﻓﯽ تمایلی ﺧﺎﻟﺺ ﺳﺎزی ﺷﺪ .ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ اﺣﯿﺎیﯽ این ایﺰوﻓﺮم ﻧﻮﺗﺮﮐﯿﺐ ﺗﻮﻟﯿﺪ ﺷﺪه ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از اﻧﺴﻮﻟﯿﻦ ﺑﻪ ﻋﻨﻮان ﺳﻮﺑﺴﺘﺮای اﻟﮑﺘﺮون ﮔﯿﺮﻧﺪه و حضور dttیا gsh ﺑﻪ ﻋﻨﻮان عوامل اﺣﯿﺎ ﮐﻨﻨﺪه مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد که grx9 در محیط این ویترو به خوبی فعال می باشد. به نظر می رسد فعالیت این پروتئین در حضور gsh کاملا وابسته به ph محیط می باشد.
|
|
کلیدواژه
|
اشریشیاکلی، برنج، بیان هترولوگ، گلوتاردوکسین
|
|
آدرس
|
دانشگاه صنعتی اصفهان, دانشکده کشاورزی, گروه بیوتکنولوژی, ایران, دانشگاه صنعتی اصفهان, دانشکده کشاورزی, گروه بیوتکنولوژی, ایران
|
|
پست الکترونیکی
|
a.shahpiri@cc.iut.ac.ir
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Production of recombinant form of rice Glutaredoxin in Escherichia coli
|
|
|
|
|
Authors
|
Shaikholeslam Esfahani E ,Shahpiri A
|
|
Abstract
|
Glutaredoxins (Grxs) are lowmolecularmass proteins with two cysteins in their active site which are involved in reversible reduction of disulfide bonds. The reduction of Grxs is catalyzed by glutathioen reductase via glithathione. Plants contain several isoforms of Grx. In this study we aim to heterologously express OsGrx9 in E.coli. To this end the gene encoding OsGrx9 was cloned in pET28a. The new construct pET28aOsGrx9 was transformed to Rosetta (DE3). After inducing T7 promoter with IPTG, proper amount of recombinant proteins were produced in soluble fraction. The recombinant proteins were purified by affinity chromatography and was analyzed for its ability to reduce Insulin ndash; an electron receptor substrate for Grxs. For this reaction we used DTT or GSH as reducing agent. The results show that OsGrx9 is able to reduce insulin in vitro and the rate of insulin reduction is pHdependent.
|
|
Keywords
|
Glutaredxin ,Escherichia coli ,Heterologous expression ,Rice
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|