همسانه‌سازی ژن کراتیناز در اشرشیاکلی و بررسی برخی از خصوصیات بیوانفورماتیکی آن

کراتیناز از آنزیم‌های پروتئولیتیک در طبیعت می‌باشد. این آنزیم تنها در حضور سوبسترای کراتین تولید می‌شود و عمدتاً پیوندهای دی‌سولفیدی را مورد هدف قرار می‌دهد. در این مطالعه از سویه باکتریاییbacillus licheniformis که قبلا از بستر مرغداری جدا شده بود، برای استخراج ژن کراتیناز استفاده شد. واکنش تکثیر ژن کراتیناز با روش pcr با استفاده از dna ژنومی استخراج شده از باکتری بومی انجام شد. پس از خالص‌سازی، ژن کراتیناز با روش همسانه‌سازی t/a به ناقل ptz57r/t منتقل شد. پس از انجام واکنش اتصال بین محصول pcr و حامل ptz57r/t، ترنسفورم محصولات لایگیشن به باکتری اشرشیاکلی سویه dh5α صورت گرفت. انجام واکنش pcr با استفاده از آغازگرهای f. b. 1 و r. b. 1 روی پلاسمید ker- ptz57r/t، منجر به تکثیر ژن کراتیناز به‌طول 1164 جفت‌باز شد که دارای توالی‌ برش آنزیم‌های xhoi و ncoi برای انتقال مناسب به وکتور بیانی (+)pet-26b بودند. استخراج پلاسمید نوترکیب از کلنی‌های شناسایی شده صورت گرفت و به باکتری اشرشیاکلی سویه bl21 انتقال داده شد که رشد کلنی‌های باکتریایی بر روی محیط lb آگار حاوی آنتی‌بیوتیک کانامایسین نشان از انتقال موفقیت‌آمیز سازه ker-pet-26b(+) به این سویه داشت. تعیین توالی نوکلئوتیدی ژن مورد نظر انجام شد. وزن مولکولی پس از ترجمه توالی نوکلئوتیدی به توالی پروتئینی معادل 39879.88 کیلو دالتون تخمین زده شد. بار خالص پروتئین معادل 0.009- با ضریب آلیفاتیک 84.73 و دارای سیگنال پپتیدی می‌باشد. این آنزیم یک سرین پروتئاز با جایگاه‌های فعال اسیدآمینه آسپارتیک 137، هیستیدین 168 و اسید آمینه سرین 325 می‌باشد. به‌طورکلی نتایج مطالعات بیوانفورماتیکی نشان می‌دهد که آنزیم کراتیناز مورد مطالعه در دسته آنزیم‌های پایدار قرار می‌گیرد که قابلیت استفاده در صنایع مختلف را دارا می‌باشد