انتقال ژن ترکیبی زیرواحد b سم وبا- پروانسولین انسانی به قارچ صدفی (pleurotus ostreatus) و ارزیابی حضور و بیان آن

دیابت بیماری‌ای است که در اثر آن بدن نمی‌تواند انسولین تولید و یا به طور موثر از آن استفاده کند. اگرچه انسولین نوترکیب به طور تجاری در باکتری و یا مخمر تولید می‌شود، ولی نیاز به توسعه سیستم‌های جایگزین برای تولید انسولین وجود دارد. در این راستا قارچ‌ خوراکی صدفی به عنوان میزبان برای تولید انسولین مورد بررسی قرار گرفت. برای این منظور ناقل دوتایی pcambctb-pins حاوی زیر واحد b سم وبا که به ژن پروانسولین انسانی الحاق شده بود، تحت کنترل پیش برنده gpd ساخته شد و با استفاده از روش انتقال ژن مبتنی بر اگروباکتریوم (سویه gv3101 با غلظت 8/0 (od600nm)) در دمای هم‌کشتی ˚c25 و محیط گزینشگر حاوی هیگرومایسین و سفوتاکسیم به بافت ژیل قارچ صدفی (pleurotus ostreatus) جدایه ایرانی (iran1649c) منتقل شد. پس از تائید اولیه قارچ‌های تراریخت با استفاده از آزمون pcr با آغازگرهای اختصاصی، درج پایدار ژن ترکیبی پروانسولین انسانی و زیر واحد b سم وبا (ctb) در ژنوم قارچ صدفی با آزمون لکه‌گذاری سادرن تایید شد. هم‌چنین بیان این ژن ترکیبی در سطح رونویسی و پروتئین با روش‌هایی نظیر rt-pcr، الایزا و ایمونوبلاتینگ مورد تائید واقع شد و در میسلیوم قارچ‌های تراریخت میزان پروتئین ترکیبی ctb و پروانسولین انسانی 04/0 درصد پروتئین محلول کل بهدست آمد. با توجه به نتایج این تحقیق و بیان موفق ژن‌های خارجی در قارچ تراریخت، می توان به توسعه و تولید داروهای زیستی در قارچ‌های خوراکی امیدوار بود.