طراحی rna دو رشته‌ای با راندمان بالا برای ایجاد ناقل rnai امگا گلیادین در گندم

فناوری ریبونوکلئیک اسید مداخله‌گر (rnai) به‌عنوان یک ابزار قدرتمند برای خاموشی بیان ژن هدفگیری شده برپایه تشابه توالی نوکلئوتیدی می‌باشد. rna مداخله‌گر می‌تواند در کاهش بیان ژنی اپی‌توپ‌های امگا گلیادین که باعث ایجاد حساسیت غذایی وابسته به گندم (wdeia) می‌شود، مورد استفاده قرار گیرد. حساسیت غذایی یا آنافیلاکسی وابسته به گندم از آنجا منشا می‌گیرد که آنتی‌بادی‌ها، به خصوص ige در فرد بیمار، نقشی مخالف عمل محافظت کنندگی خود دارند. در گیاهان، rna دو رشته‌ای با انتهای آزاد دو یا سه نوکلئوتیدی بخاطر قابلیت شناسایی با آنزیم dicer یکی از ارکان مهم rna مداخله‌گر محسوب می‌شود. بنابراین توجه به ایجاد انتهای آزاد ʹ3 با نوکلئوتید‌های گوانین-سیتوزین در rnai دورشته‌ای اختصاصی ژن امگا گلیادین با عملکرد بالا هدف‌گیری شد. در این تحقیق عملکرد بالای ساختار ثانویه rna دو رشته‌ای با محتوای نوکلئوتیدی گوانین-سیتوزین 35 تا 50 درصد بررسی شد. قطعات سنس و آنتی‌سنس طبق نقشه کاست در ناقل ptg19-t همسانه‌سازی شده و سپس برای تولید و ارزیابی مولکول rnai مورد نظر به ناقل بیانی pahc25 منتقل شد. انرژی آزاد موثر برای آنزیم dicer، تغییرات نوکلئوتیدی برای نواحی rna دو رشته‌ای و درصد گوانین-سیتوزین مورد ارزیابی اولیه قرار گرفتند. بطوری که در ناحیه انتخابی برای ساخت کاست، میزان نوکلئوتید‌های گوانین- سیتوزین در حدود 35.7 الی 45.2 درصد و انرژی آزاد 24.7- الی 28.7- کیلوکالری برمول ارزیابی شد. پس از همسانه‌سازی موفق قطعه سنس، شباهت 100 درصدی برای ناحیه تشکیل دهنده ساقه‌سنجاق‌سری (hair-pin stem) به طول 185 جفت باز حاصل شد. طبق نقشه کاست توالی باقی مانده از قطعه سنس نیز نقش فاصله انداز و یا تشکیل دهنده لوپ در مولکول rnaiرا ایفا نمود. سرانجام، با انتقال کاست rnai به ناقل بیانی pahc25، ناقل خاموشی اختصاصی و با راندمان بالا برای ژن امگا گلیادین نوع d1 حاوی اپی‌توپ wdeia تولید شد.