همسانه سازی و انتقال ژن atcdpk5 به توتون

تنش‌های محیطی مهم‌ترین عامل کاهش عملکرد محصولات زراعی هستند. ژن atcdpk5 یکی از ژن‌های خانواده‌ بزرگ cdpk در گیاهان است که نقش مهمی در پاسخهای دفاعی گیاه نسبت به تنش‌های غیر زیستی دارد. هدف از این پژوهش همسانه سازی ژن atcdpk5و انتقال آن به توتون به‌منظور افزایش تحمل به تنش‌های غیر زیستی بود. بدین منظور ابتدا rna از برگ گیاه آرابیدوپسیس استخراج و cdna ساخته شد. ژن atcdpk5 توسط انجام واکنش زنجیره‌ای پلیمراز با آغازگرهای اختصاصی تکثیر و به ناقل pgem-t وارد و در باکتری e.coli ‌کلون شد. سپس قطعه‌ ژن مورد نظر درون ناقل pbi121 قرار داده شده و در باکتری e.coliکلون شد. یکپارچگی سازه حاوی ژن atcdpk5 توسط انجام کلونی pcr تایید شد و توالی‌یابی قطعه، وجود ژن را اثبات کرد. پلاسمید نوترکیب حاصل از طریق تکنیک اگرواینفکشن به گیاه توتون منتقل شد. پس از هم‌کشتی با اگروباکتریوم، رشد ریزنمونه‌های گیاه توتون در محیط انتخابی حاوی غلظت‌های مختلف کانامایسین و سفوتاکسیم تراریختی آن‌ها را تایید کرد. گیاهچه‌های تراریخت به محیط ریشه‌زایی و سپس به گلدان منتقل شدند. واکنش زنجیره‌ای پلیمراز با آغازگرهای اختصاصی تراریخت بودن گیاهان توتون را در سطح dna وcdna تایید کرد.