evaluation of bhk-21 cell line for specific viruses by two different pcr methods

The selection of suitable cell cultures for use in the biological industry as well as research and diagnostic studies is critical. one of the factors affecting cell culture that can affect the results of studies is the contamination with viral agents. therefore, efforts to preserve the health of cell cultures from contamination sound logical, and the use of virus-free cells is vital in research and diagnostic studies as well as in the manufacturing industries. for this purpose, it is crucial to use fast and correct diagnostic methods to detect the presence of critical viral contaminants in cells. moreover, the use of susceptible diagnostic methods is also doubly important, especially in the case of contaminants that may remain hidden. therefore, in this study, the bhk-21c5 cell line, one of the most widely used cells in the production and quality control of biological products and virological studies, was examined in terms of contamination with the most important viruses such as bvd and blv. detection of possible contaminants by using two-step rt-pcr to detect the 5ʹ utr portion of the bvd virus. moreover, nested pcr was carried out to detect the blv virus using the gp51 env gene region. also, an flk cell line and hela cell line that were consistently contaminated with the blv virus were used as positive controls in nested pcr. due to the absence of bands in the bhk-21c5 cell column and the bandwidth observed in the positive control column (bvdv) in the range of 283 bp, non-contaminating of the cell clone with the bvd virus was proved. also, no band was observed in well related to bhk-21c5 cell, and no cell clone contamination with blv was confirmed, and in wells related to the positive controls (flk and hela cells), the bands have seen in the range 444bp. so, the results showed that no obvious or covert viral contamination effect was observed in the cell clone studied. hence, the use of this cell line seems unobstructed in the quality control and production of biological products and research and diagnostic studies.

ارزیابی لاین سلولی bhk-21 از نظر آلودگی به ویروس های اختصاصی با استفاده از دو روش متفاوت pcr

انانتخاب کشت های سلولی مناسب برای استفاده در صنایع بیولوژی و همچنین تحقیقات و مطالعات تشخیصی بسیار حیاتی است. یکی از عوامل موثر بر کشت های سلولی که می تواند نتایج مطالعات را تحت تاثیر قرار دهد، آلودگی این سلول ها به عوامل ویروسی است. بنابراین، تلاش برای حفظ سلامت کشت های سلولی از آلودگی و استفاده از سلول های عاری از ویروس در تحقیقات و مطالعات تشخیصی و همچنین در صنایع تولیدی بسیار مهم است. بدین منظور استفاده از روش های تشخیصی سریع و صحیح برای تشخیص وجود آلاینده های ویروسی مهم در سلول ها حائز اهمیت است. علاوه بر این، استفاده از روش های تشخیصی بسیار حساس نیز اهمیت دو چندانی دارد، به ویژه در مورد آلاینده هایی که ممکن است پنهان بمانند. بنابراین در این مطالعه رده سلولی bhk-21c5 که یکی از پرکاربرد ترین سلول ها در تولید و کنترل کیفی محصولات بیولوژیکی و همچنین مطالعات ویروس شناسی است، از نظر آلودگی به مهم ترین ویروس ها یعنی bvd و blv مورد بررسی قرار گرفت. شناسایی آلاینده‌های احتمالی با استفاده از rt-pcr دو مرحله‌ای برای شناسایی بخش 5’ utr ویروس bvd انجام شد. علاوه بر این، nested pcr برای شناسایی ویروس blv با استفاده از ناحیه ژن gp51 env انجام گرفت. همچنین، یک رده سلولی flk و رده سلولی hela که به طور مداوم به ویروس blv آلوده بودند به عنوان کنترل مثبت در nested pcr استفاده شد. با توجه به مشاهده باند 283 bp در کنترل مثبت ویروس bvd و عدم مشاهده این باند در سلول bhk، هیچ گونه آلودگی ناشی از این ویروس در این سلول ردیابی نشد. همچنین با توجه به ظهور باند 444 bp در سلول های کنترل مثبت یعنی سلول hela و سلول flk مربوط به ویروس bl و عدم مشاهده این باند در سلول bhk، این سلول آلوده به این ویروس نیز نمی باشد. بنابراین نتایج نشان داد که هیچ اثری از آلودگی ویروسی آشکار یا پنهان در کلون سلولی مورد مطالعه مشاهده نشد. از این رو استفاده از این کلون سلولی در کنترل کیفی و تولید محصولات بیولوژیکی و مطالعات تحقیقاتی و تشخیصی بلامانع می باشد.