characterization and comparison of mesenchymal stem cell-derived exosome isolation methods using culture supernatant

Exosomes are extracellular endosomal nanoparticles, which are formed under complex processes during the formation of multivesicular bodies. they are also achieved from conditioned media of a variety of cell types, especially mesenchymal stem cells (mscs). exosomes can modulate intracellular physiological actions via signaling molecules on the surface or secretion of components to the extracellular spaces. furthermore, they are potentially used as crucial agents for cell-free therapy; however, their isolation and characterization can be challenging. in the current study, two methods of exosome isolation have been characterized and compared using a culture media of adipose-derived mesenchymal stem cells, namely ultracentrifugation and a commercial kit; moreover, the efficiency of these two methods was highlighted in this study. two different isolation methods of exosomes from mscs were used to compare the efficiency of exosomes. for both isolation methods, transmission electron microscopy, dynamic light scattering (dls), and bicinchoninic acid (bca) assay have been performed. the electron microscopy and dls indicated the presence of exosomes. moreover, the kit and ultracentrifugation isolates contained approximately comparable amounts of protein measured by the bca. overall, the two isolation methods had similar performances. although ultracentrifugation is used as a gold standard for exosome isolation, the commercial kit has some advantages and can be applied alternatively according to its cost-effectiveness and time-saving properties.

شناسایی و مقایسه روش‌های جداسازی اگزوزوم‌های مشتق از سلول‌های بنیادی مزانشیمی حاصل از سوپرناتانت کشت

اگزوزومها نانوذرات اندوزومی خارج سلولی هستند که در طی فرآیندهای پیچیده در حین تشکیل مالتی وزیکولار بادی‌ها شکل گرفته اند. اگزوزوم‌ها همچنین از سوپرناتانت محیط‌های انواع سلول‌ها، به ویژه سلول‌های بنیادی مزانشیمی (mscs) به دست می‌آیند. اگزوزوم‌ها می‌توانند اعمال فیزیولوژیکی داخل سلولی را از طریق مولکول‌های پیام‌رسان روی سطح یا ترشح اجزا به فضاهای خارج سلولی تعدیل کنند. اگزوزوم‌ها به طور بالقوه به عنوان عوامل مهم برای درمان عاری از سلول مورد استفاده قرار می‌گیرند با اینحال، جداسازی و شناسایی آنها می‌تواند چالش برانگیز باشد.در مطالعه حاضر، ما با استفاده از سوپرناتانت محیطی سلول‌های بنیادی مزانشیمی مشتق از سلول‌های چربی (adscs) دو روش جداسازی اگزوزوم شامل روش اولتراسانتریفیوژ و روش کیت تجاری و میزان کارایی این دو روش را بررسی نمودیم.دو روش جداسازی اگزوزوم از سلول‌های بنیادی مزانشیمی برای مقایسه کارایی اگزوزوم‌ها استفاده شد. برای هر دو روش جداسازی، میکروسکوپ الکترونی عبوری (tem)، میزان پراکندگی نور (dls) و سنجش پروتئین توتال به روش اسید بی‌کینکونیک (bca) انجام شد.میکروسکوپ الکترونی و dls وجود اگزوزوم را نشان داد. علاوه بر این، اگزوزوم‌های جدا شده از دو روش جداسازی اولتراسانتریفیوژ و کیت تجاری حاوی مقادیر تقریبا قابل مقایسه ای از پروتئین اندازه گیری شده با روشbca بود.به طور کلی، دو روش جداسازی عملکرد مشابهی داشتند. اگرچه اولتراسانتریفیوژ به عنوان روش استاندارد اصلی برای جداسازی اگزوزوم استفاده می‌شود، اما کیت تجاری نیز دارای مزایایی است و می‌تواند با توجه به صرفه‌جویی در میزان هزینه و زمان جایگزین این روش استاندارد گردد.