molecular survey of brucella melitensis field isolates using sequence-based pcr of outer membrane protein 31

Sequence-based polymerase chain reaction (pcr) has been introduced as an effective and reliable method for bacterial strain typing, which could provide a reliable typing approach for clinical laboratories. this study aimed to describe the reproducibility and performance of the outer membrane protein 31 (omp31)-based pcr, as a molecular genotyping tool for brucella melitensis (b. melitensis) typing. the 31 kd outer-membrane protein of brucella, which encodes the omp31 gene, can be applied as an antigen to diagnose brucellosis. for this purpose, 146 samples were taken from human blood samples, bovine and camel lymph nodes, as well as sheep and goat aborted fetuses, including fetal kidney, abomasum, liver, lung, spleen, and heart for bacteriological investigation. the molecular detection of the omp31 and is711 genes was performed using the isolated b. melitensis (n=14). the sequencing of the omp31 gene of b. melitensis in the iranian field isolates was also performed for the whole gene sequencing. the homology of all sequences was then checked with the reported national center for biotechnology information sequences using a basic local alignment search tool for the nucleotide diversity evaluation.  the findings revealed that b. melitensis isolates were recovered from 14 examined cases and confirmed by the is711-based pcr with a pcr product of 731 bp. moreover, 14 iranian b. melitensis sequences clustered together as a monophyletic grouping with bootstrap support of 63, and they were closely related to the b. melitensis reference isolates. this omp31based phylogenetic placement strongly indicates the monophyletic origin of the iranian b. melitensis in different animals and human hosts.

بررسی مولکولی جدایه‌های فیلدی بروسلا ملیتنسیس با استفاده از PCR مبتنی بر توالی پروتئین غشای خارجی31 (Omp31)

تعیین توالی ژنوم با استفاده ازPCR به عنوان روشی موثر و تکرارپذیر و مطمئن برای تایپینگ سویه باکتریایی معرفی و در آزمایشگاهای بالینیاستفاده می شود. هدف ازاین مطالعه توصیفقابلیتتکرارپذیریو کاربرد PCR براساس Omp31 به عنوان ابزاریبرای تشخیص مولکولی بروسلا ملیتنسیس است. از پروتئین غشای بیرونی Omp31 با وزن مولکولی 31کیلودالتونمی‌توان به عنوان آنتی ژن برای تشخیص بیماری تب مالت استفاده کرد. برای این منظور در این مطالعه ، 146 نمونه شامل خون انسان ، غدد لنفاوی گاو و شتر و همچنین جنین سقط شده گوسفند و بز ( کلیه جنین ، شیردان ، کبد ، ریه ، طحال و قلب) برای بررسی وجود باکتری بروسلا ملیتنسیس انتخاب شدند. تشخیص مولکولی بروسلا ملیتنسیس های جداسازی شده با استفاده از دو ژن Omp31 و IS711 صورت گرفت. ژن Omp31 در ایزوله های بروسلا ملیتنسیس فیلدی ایران تعیین توالی شد.مشابهت توالی های بدست آمده با توالی های گزارش شده در NCBIبا استفاده از یک ابزار جستجوی همترازی برای ارزیابی تنوع نوکلئوتیدی بررسی شد.نتایج نشان داد که 14جدایه بروسلا ملیتنسیستوسطتکثیر مولکولی ژنIS711با محصول731جفت باز تأیید شد. در تعیین توالی ژنOmp31 تعداد 14توالی ایرانیبروسلا ملیتنسیسبه صورت یک گروه مونوفیلتیک با پشتیبانی از بوت استرپ 63 مشخص شدند و بیشترین ارتباط را با جدایه های مرجعبروسلا ملیتنسیس نشان دادند.آنالیز فیلوژنتیک بر پایه Omp31یک ابزار قدرتمند برای تشخیص بروسلا ملیتنسیس و نشانگر منشأ یکسان بروسلا ملیتنسیس جدا شده از میزبان های مختلفحیوانی و انسانی در ایران است.