comparison of cattle serum antibody responses to five different mycobacterial antigens in an elisa system

The presence of common zoonosis diseases caused by mycobacterium tuberculosis complex (mtbc) and nontuberculous mycobacteria (ntm), such as johne's and crohn's diseases, poses a public health threat and economic losses to iranian livestock. therefore, the early detection of mycobacteria is of paramount importance. in this regard, enzyme-linked immunosorbent assay (elisa) is a new, simple to use, rapid, and useful diagnostic tool. this study was performed to evaluate different crude antigens obtained from mycobacterium species using an indirect elisa test to identify the mycobacterial infection in infected livestock. five different strains of mycobacteria including m. tuberculosis, m. phlei, m. bovis, m. avium subspecies paratuberculosis, and m. bovis an5 were cultured. the crude antigens in the samples were precipitated with trichloroacetic acid 4%. the sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis of crude antigens isolated from different mycobacterium species was reported. the total level of protein was determined by the lowry protein assay. after the crude antigen preparation, the elisa test was performed and the results were compared with the purified protein derivative skin test. data analysis was performed using spss software version 25. all five strains were detected in more than 92% of healthy animals. the highest sensitivity of elisa tests was in m. bovis an5 antigen which was greater than 83%. the highest diagnostic specificity and efficiency of assays were in m. avium subspecies paratuberculosis which was 95.83% and over 83%, respectively. regarding the results, m. avium subspecies paratuberculosis and m. bovis an5 antigens were promising candidates for the design of diagnostic elisa due to their sensitivity, specificity, and efficiency.

مقایسه پاسخ آنتی بادی سرم گاو به پنج آنتی ژن مختلف مایکوباکتریائی با استفاده از تست الایزا

با توجه به وجود بیماری های مشترک بین انسان و دام ناشی از کمپلکس مایکوباکتریوم توبرکلوزیس (MTBC) و مایکوباکتریوم های غیر توبرکلوزیسی (NTM) ، مانند بیماری یون در حیوانات و بیماری کرون در انسان، تشخیص به موقع مایکوباکتریوم می تواند به کنترل این بیماری ها ومشکلات بهداشتی و خسارات بزرگ اقتصادی در دام های ایران کمک شایانی کند. از جمله روش های تشخیصی پر کاربرد، روش ELISA است که روشی آسان، سریع و مفید است. در این تحقیق، ما سعی در ارزیابی آنتی ژن های خام گونه های مختلف مایکوباکتری با استفاده از یک آزمایش ELISA غیر مستقیم داشتیم. هدف از این ارزیابی تشخیص عفونت های مایکوباکتریائی مختلف در دامهای آلوده است. پنج سویه مختلف مایکوباکتریوم کشت شد و توسط 4٪ TCA رسوب داده شد. SDSPAGE آنتی ژن های خام مایکوباکتریوم های مختلف انجام شد. غلظت پروتئین ها با روش پروتئین سنجی لوری تعیین شد. پس از تهیه آنتی ژن های خام مایکوباکتریوم، آزمایش ELISA انجام شد و نتایج آزمون ELISA با آزمایش PPD پوستی مقایسه و تجزیه و تحلیل داده ها با نرم افزار SPSS انجام شد. در نتیجه این مطالعه، همه آنتی ژن های مورد مطالعه بیش از 92 درصد توانایی تشخیص دام های سالم را داشتند. بیشترین حساسیت آزمایش های ELISA به آنتی ژن مایکوباکتریوم بوویس سویه AN5 بیش از 83 درصد و بالاترین ویژگی تشخیصی مایکوباکتریوم آویوم زیر گونه پاراتوبرکلوزیس 83/95 درصد و بالاترین بازده آزمایشهای تشخیصی بیش از 83 درصد در رابطه با این آنتی ژن است. از این مطالعه نتیجه گیری شد که مایکوباکتریوم آویوم زیر گونه پاراتوبرکلوزیس به دلیل حساسیت، ویژگی و کارایی، کاندید مناسبی برای طراحی الایزا تشخیصی است.