molecular identification and genotyping of theileria orientalis type 3 (buffeli) isolated from cattle using nested-pcr assay in guilan province, iran

Protozoan parasites of the genus theileria are tickborne parasites that have been found in many species of mammals. more than a dozen species of theileria have been found in cattle, water buffalo, sheep, and goats. theileria orientalis is a nonpathogenic blood protozoan parasite that was detected and identified during a regular investigation of piroplasmida infection in indigenous cattle in the spring of 2019 in northern provinces of iran. in total, 92 blood samples were collected from different areas of guilan and mazandaran provinces, iran during the spring. the giemsa stained blood smears did not show any parasitic infection; however, t. orientalis was identified by 18s rrna gene polymerase chain reaction (pcr) and dna sequencing. the specific sequenced dna for t. orientalis was registered in genbank under the accession number mn453385. the partial 18s rrna gene sequence of the obtained dna showed 100% nucleotide identity with reference sequences for the t. orientalis that have been registered from europe, africa, and asia. additionally, molecular phylogenetic studies have shown that t. orientalis iran gc98-01 isolate belongs to nonpathogenic t. orientalis type 3 (buffeli). in this study, the indigenous bos indicus cattle were detected as asymptomatic carriers of theileria spp. infection. here, we identified and genotyped t. orientalis for the first time as t. orientalis type 3 (buffeli) in iran using molecular phylogenetic analysis and registered the 18s rrna gene sequence of the t. orientalis gc98-01 isolate in genbank.  moreover, rare t. annulata infection was detected in cattle using seminested pcr in mazandaran (miankaleh peninsula). the t. orientalis can be differentiated from other theileria and babesia haemoprotozoan parasites by specific molecular assays.

شناسایی و تعیین ژنوتیپ ملکولی تیلریا اورینتالیس تیپ 3 (بوفلی) در گاوهای استان گیلان، ایران با روش nested-PCR

انگل‌های جنس تیلریا تک‌یاخته‌هایی هستند که در پستانداران بوسیله کنه منتقل می‌شوند. تعداد بسیاری از گونه‌های تیلریا در گاو، گاومیش، گوسفند و بز یافت شده است. گونه تیلریا اورینتالیس تک‌یاخته‌ای غیربیماریزا است. این مطالعه بمنظور شناسایی انگل‌های پیروپلاسمایی گاوهای بومی در استان‌های شمالی ایران در بهار سال 2019 صورت گرفت. مجموعاً 92 نمونه خون از مناطق مختلف استان‌های گیلان و مازندران تهیه شد. در مشاهده میکروسکپی لام‌های خونی که با رنگ گیمسا بررسی شدند انگلی دیده نشد ولی بروش PCR و با استفاده از بررسی ژن 18S rRNA تک‌یاخته و توالی‌یابی DNA، گونه تیلریا اورینتالیس شناسایی شد. توالی ملکول DNA تیلریا اورینتالیس در بانک جهانی ژن با شماره دسترسی MN453385 ثبت گردید. توالی 18S rRNA بدست آمده بطور 100% با توالی‌های مرجع تیلریا اورینتالیس مربوط به اروپا، افریقا و آسیا منطبق بود. همچنین در بررسی فیلوژنی ملکولی نشان داده شد که این ایزوله متعلق به تیپ 3 (بوفلی) تیلریا اورینتالیس و غیربیماریزا می‌باشد. این تحقیق نشان داد که گاوهای بومی، بشکل حاملین فاقد علایم بیماری برای گونه‌های تیلریا می‌باشند و تیلریا اورینتالیس تیپ 3 برای نخستین بار در ایران با استفاده از ژن 18S rRNA شناسایی و توالی مربوط به این ایزوله GC9801 در بانک ژن ثبت گردید. علاوه براین عفونت نادر تیلریا آنولاتا در گاوهای استان مازندران (شبه جزیره میانکاله) با تکنیک seminested PCR تشخیص داده شد. لازم است تیلریا اورینتالیس با استفاده از روش های ملکولی از سایر تک‌یاخته های خونی دیگر چون تیلریا و بابزیا تمیز داده شود.