identification of iranian bhk-21-c5 cell line by two steps polymerase chain reaction

Authentication of animal cell lines in cell banks is one of the most important programs regulated during cell culture and storage. this operation provides a thorough and beneficial document which can be advantageous for the functional use of animal cell lines. therefore, various procedures are used to prevent misidentified cells, crosscontamination to other cell lines, and mislabeling errors leading to incorrect assessment. these contaminants can result in major financial disadvantages. one of the practical methods in this field is a molecular procedure which can demonstrate more accurate results. in the present study, the bhk-21 (c5) was characterized, and it was tried to determine the identity of bhk-21 (c5) as a continuous cell line by polymerase chain reaction (pcr) molecular procedure in iran. the cytochrome c oxidase i (co1) gene was selected as a prevalent dna fragment for the authentication of the bhk-21 (c5) cell line, along with six cell lines, including chinese hamster ovary,  lamb kidney, razi bovine kidney, medical research council cell strain 5, monkey green kidney, and goat lymphocyte. after amplification, pcr products were analyzed by agarose gel electrophoresis to ensure their accuracy. the results of characterization were indicated, cell viability was estimated to be about 92%, and a uniform cell culture was obtained. the doubling time and µ ratio equivalent were obtained at 20.5 h and 0.03, respectively. sterility tests revealed that the cell seed was free of bacterial, mycoplasma, and mycobacterial infections. the results of molecular identification revealed that the identification of this cell line was approved and can be used in studies, diagnosis, production, and quality control of biological products.

تعیین هویت لاین سلولی BHK-21-C5 ایران با PCR دو مرحله ای

تعیین هویت لاین سلولی BHK21C5 موجود در ایران با استفاده از PCR دو مرحله ایچکیده فارسیتعیین هویت لاین‌های سلولی حیوانی در بانک‌های سلولی یکی از مهمترین برنامه‌ها طی عملیات کشت سلول و ذخیره سازی سلول است که مستنداتی را ارائه می‌دهد که می‌تواند برای استفاده کاربردی از لاین‌های سلولی حیوانی مفید باشد. بنابراین تلاش‌ها برای جلوگیری از شناسایی نادرست سلول‌ها، آلودگی متقاطع با لاین‌های سلولی دیگر و خطا در لیبل گذاری با استفاده از روش‌های مختلف ادامه دارد و اغلب منجر به ارزیابی نادرست می‌گردد. این آلودگی‌ها در بسیاری از موارد غیر قابل جبران می باشد. یکی از روش‌های کاربردی در این زمینه روش مولکولی است که می‌تواند نتایج را با دقت بیشتری نشان دهد. در این مطالعه خصوصیات BHK21 (C5) تعیین شد و سعی شد هویت BHK21 (C5) به عنوان یک لاین سلولی پیوسته در ایران به وسیله‌ روش مولکولی PCR تعیین شود. در این مطالعه ژن سیتوکروم اکسیدازC (COI) به عنوان یک قطعه DNA رایج برای تعیین هویت لاین سلولی BHK21(C5) در کنار شش لاین سلولی شامل،CHO, LK, RBK, MRC5, VERO, GL با استفاده از PCR و همچنین تکثیر هرلاین سلولی با پرایمر مخصوص خودش انتخاب شد. پس از تکثیر، محصولات PCR با ژل آگاروز الکتروفورز به منظور اطمینان از صحت آن‌ها مورد بررسی قرار گرفت. نتایج آزمایشات نشان داد که درصد بقا حدود 92% تخمین زده شد و یک کشت سلول یک نواخت به دست آمد. زمان دو برابر شدن و نسبت μ معادل 5/20 ساعت و 03/0 بدست آمد. آزمایشات استریلیتی نشان داد که بذر سلول عاری از آلودگی‌های باکتریایی، مایکوپلاسمایی و مایکوباکتریومی بود. نتایج شناسایی مولکولی این سلول نشان می‌دهد که تعیین هویت این لاین سلولی اثبات شده است و می‌تواند در تحقیقات، مطالعات تشخیصی و تولید و کنترل کیفیت فراورده های بیولوژیک مورد استفاده قرار گیرد.