isolation and purification of low molecular weight proteins from culture filtrate of mycobacterium tuberculosis strain c

In the last couple of years, a number of new and rapid tests for the diagnosis of tuberculosis (tb) have been developed based on the low molecular weight antigens from mycobacterium tuberculosis (mtb) culture supernatant. this study aimed to isolate and purify low molecular weight antigens secreted by mtb strain c for diagnostic purpose. the secretory proteins from culture filtrate of mtb were extracted using ammonium sulphate precipitations and sephadex-g50 gel chromatography. the obtained antigen fractions were analyzed for their protein concentrations and approximate molecular weight using lowry method and sds-page (12.5%), respectively. dot-elisa and western blot assay was performed to confirm the presence of purified low molecular weight proteins isolated from mtb using sera from pulmonary tuberculosis patients (polyclonal antibodies). during chromatography, low molecular weight proteins were separated, that was approximately 0.7 mg/ml of the total proteins (1.662 mg/ml). the purified protein fractions in molecular weight range of 14 kda-41kda appeared during sds-page analysis. the chromatographic band fraction in the weight range of 30-41 kda was identified in the tb patients’ sera using western blotting. the low molecular weight proteins in the culture filtrate of mtb strain c were purified using ammonium sulphate and chromatography. these fractions were confirmed using western blotting. the obtained results might support the hypothesis that the mtb culture filtrate antigens could be used as a rapid and sensitive assay for the detection of patients with pulmonary tb.

جداسازی و خالص سازی پروتئین های سبک وزن از فیلترای کشت مایکوباکتریوم توبرکلوزیس سویه سی (ATCC 35808)

در چندسال گذشته، تعدادی از آزمایشات جدید و سریع با هدف تشخیص بیماری سل توسعه یافته است که بر پایه آنتی ژن های سبک وزن ترشح شده از مایکوبکتریوم توبرکلوزیس می باشند که در محیط کشت باکتری ترشح می شوند. ما در این مطالعه، جداسازی و خالص سازی آنتی ژن های با وزن موکلولی پایین که از Mtb سویه C ترشح می شوند و استفاده از آنها جهت اهداف تشخیصی را مورد هدف قرار دادیم. در این مطالعه، پروتئین های ترشحی Mtb با استفاده از رسوب دهی توسط نمک سولفات آمونیوم وژل کروماتوگرافی ستون SephadexG50 استخراج شدند. فرکشن های آنتی ژنی به دست آمده برای تعیین غلظت پروتئین و تخمین وزن تقریبی مولکولی آنها به ترتیب با روش لوری و SDS PAGE (12.5%) مورد بررسی قرار گرفتند. سنجش DOTELISA و وسترن بلات با استفاده از سرم بیماران مبتلا به سل ریوی (آنتی بادی های پلی کلونال) برای تأیید حضور پروتئین های خالص شده با وزن مولکولی کم، جدا شده از Mtbانجام شد. با استفاده از ژل کروماتوگرافی ، پروتئین های با وزن مولکولی پایین جدا شدند که تقریباً 7/0میلی گرم در میلی لیتر از کل پروتئین ها (662/1 میلی گرم در میلی لیتر) بود. در تجزیه و تحلیل SDSPAGE ، پروتئین های خالص با وزن مولکولی در محدوده 14kDa تا41kDa ظاهر شدند. در آنالیز وسترن بلات فرکشن های کروماتوگرافی شده با استفاده از سرم بیماران سل، ما توانستیم باندهایی را در محدوده 30kDa تا 41kDa شناسایی کنیم. پروتئین های با وزن مولکولی پایین موجود در فیلتراسیون کشت Mtb سویه C با استفاده از نمک سولفات آمونیوم و کروماتوگرافی خالص شدند. این فرکشن ها با روش وسترن بلات تأیید شدند. نتایج به دست آمده ممکن است این فرضیه را پشتیبانی کند که آنتی ژن های موجود در فیتراسیون کشت Mtb می تواند به عنوان یک روش سریع و حساس برای شناسایی بیماران مبتلا به سل ریوی مورد استفاده قرار گیرد.