molecular identification of mycoplasma agalactiae in iran based on p30 gene

Mycoplasma agalactiae (m. agalactiae) is known as the main etiological agent of contagious agalactia (ca). the ca is a disease affecting dairy sheep and goats, the main characteristics of which include keratoconjunctivitis, arthritis, and mastitis. this pathogen results in milk production reduction and suppression, thereby leading to serious economic loss. in the present study, 125 sheep and goat samples were collected from 15 provinces of iran. cultural and molecular methods were used for sample characterization. after extracting genomic dnas using the phenol/chloroform method, the pcr technique was employed to detect mycoplasma genus in 163bp fragment of 16s rrna gene (m-pcr) and m. agalactiae in 800bp fragment of conserve and specific p30 lipoprotein gene (p30-pcr) in cultural and clinical samples. finally, to validate the experimental approach, a 375 bp amplicon of p80 lipoprotein was amplified using the ma-pcr. out of 125 samples under investigation, 43 cases were positive, and mycoplasma colonies were observed in the pleuropneumonia-like organisms agar culture. based on the results of the m-pcr method, 61 specimens (out of 125 samples) were scored positive for mycoplasma presence. furthermore, 20 samples were positive according to the p30-pcr data. it should be mentioned that the ma-pcr was performed based on the p80 gene on 125 total samples to further verify the results for m.agalactiae detection. based on the obtained data, p30 and p80 genes were presented and amplified in all iranian m. agalactiae isolates (n=20). our results indicated that the p30 gene was conserved and specific to all iranian m. agalactiae isolates and this new p30-pcr method (as an ma-pcr technique) might be useful in the detection of this pathogen.

شناسایی مولکولی مایکوپلاسما آگالاکتیه در ایران بر اساس ژن P30مائده بابازاده، سید علی پوربخش، زهرا نورمحمدی، مجید اسمعیلی زاد، حسین گودرزی

مایکوپلاسما آگالاکتیه عامل اصلی بیماری آگالاکسی واگیر دار در گوسفند و بز است که با علائمی از جمله ورم غدد پستانی، مفاصل و ملتحمه شناسایی می شود. این پاتوژن به عنوان عامل اصلی کاهش و حتی قطع شیر شناسایی شده و در نتیجه خسارات اقتصادی جدی به بار می آورد. در این مطالعه 125 نمونه از گوسفندان و بزهای مشکوک به بیماری از 15 استان کشور جمع آوری و جهت شناسایی نمونه ها از روش کشت و بررسی های مولکولی استفاده شد. DNAی ژنومی به روش فنلکلروفرم تخلیص و تست PCR برای شناسایی جنس و گونه مایکوپلاسما آگالاکتیه انجام شد. جهت شناسایی جنس مایکوپلاسما از آغازگرهای مربوط به ژن 16SrRNA با محصول PCR به طول 160 جفت باز تکثیر شد. جهت شناسایی گونه، ژن پایدار و اختصاصی P30 به طول 800 جفت باز به کمک آغازگرهای اختصاصی P30 در مایکوپلاسما آگالاکتیه مورد شناسایی قرار گرفت و در نهایت جهت تایید به تکثیر ژن P80 با قطعاتی به طول 375 جفت باز پرداخته شد. در روش تشخیصی کشت، 43 نمونه از 125 نمونه مثبت شده و در محیط PPLO آگار تشکیل کلنی مایکوپلاسما دادند. در روش PCR، در 61 نمونه ژن 16srRNA تکثیر و جنس مایکوپلاسما در این نمونه ها تایید شد. در مرحله بعد در 20 نمونه با تکثیر ژن مربوط به پروتئین اختصاصی P30 گونه مایکوپلاسما آگالاکتیه تایید و در مرحله آخر ژن مربوط به لیپوپروتئین P80 نیز دقیقا در همان 20 نمونه (از مجموع 125 نمونه) شناسایی شد. نتایج حاصل از این تحقیق نشان می دهد که روش P30PCR جهت شناسایی گونه مایکوپلاسما آگالاکتیه جایگزین مناسبی برای روش های قبلی محسوب شده و به عنوان یک روش قابل اعتماد و موفقیت آمیز جهت تایید گونه آگالاکتیه معرفی می شود.